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标题:DNA用什么方法定量最准确 ?

菠萝菠萝蜜[使用道具]
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请高手指教:
我从培养的肿瘤细胞提取DNA后,用UV检测其含量,结果如下:

细胞浓度:2.4 X100,000/mL
A260/280:1.8139 dsDNA 浓度 599.32ug/mL

按照如上结果,平均每个细胞的DNA 含量约为2,500pg,远远高于每个双倍体正常细胞的DNA含量(7.1pg).如何解释此结果?

多谢!!  
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喵咪[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 菠萝菠萝蜜 于 2011-9-21 12:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请高手指教:
我从培养的肿瘤细胞提取DNA后,用UV检测其含量,结果如下:

细胞浓度:2.4 X100,000/mL
A260/280:1.8139 dsDNA 浓度 599.32ug/mL

按照如上结果,平均每个细胞的DNA 含量约为2,500pg,远远高于每个双倍体正常 ...

是不是细胞浓度计算错了,要不不可能高这么多的!
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雷子![使用道具]
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如果已知某细菌的基因组DNA中碱基对的总数,对某一细菌菌落进行DNA抽提后,采用分光计测DNA的量,再推算菌落中细菌的数量,这个方法是否可行?
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coolcool[使用道具]
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不同意上面的看法,请把实时定量几种标准的问题搞清楚
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coolcool[使用道具]
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不同意上面的看法,请把实时定量几种标准的问题搞清楚
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浆果儿cc[使用道具]
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如果用分光广度计定量首先要保证样品的纯度?  
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缘yuan[使用道具]
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我们也在用PicoGreen做DNA定量------简单快速准确!下面给出我们简化的
protocol,请参考:

Preparation of reagents

--1 x TE buffer

1 x TE working solution was prepared by diluting the concentrate 1:20 x in sterile, distilled DNase free water.

Use this 1 x TE buffer as blank and for preparing all the DNA standard dilutions.
---PicoGreen working solution

Dilute the PicoGreen Reagent 1:200 in 1 x TE buffer in a plastic tube (protect from light). For the 96-well plate 100 ul of diluted reagent is needed/well

Note: This solution must be used within a few hours after preparation.

---DNA Standard Curves

1. Dilute the provided Lambda DNA standard 1:25 in 1 x TE buffer (4ug/ml).

2. For the standard curve, prepare further dilutions of this 4ug/ml DNA stock in 1 x TE buffer =2025ng/ml, 675ng/ml, 225ng/ml, 75ng/ml and 25ng/ml. Use TE buffer as a blank.



Procedure

l Pipette 100 ul blank, DNA standard dilutions or samples to the wells of a white or black 96-well strip plate.

l Add 100 ul of the diluted PicoGreen reagent.

l Mix well and allow standing at room temperature for 2-5 min protected from light.

l Measure with fluorescent microplate reader. Set the wavelengths of the filters used are excitation 485 nm and emission 538 nm or 518 nm.

l Generate standard curve. Read the unknown samples from the curve.
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