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细菌显微镜计数方法
1、 取1 ml样品,超声40 s,低功率,0.2 cycle/second。
2、 加200 微升,100 微克/ml DAPI,暗处染色5 min。
3、 用0.22 微米,黑色聚碳酸酯膜过滤收集,然后用无菌水冲洗两次。
4、 加一滴荧光显微镜油于载玻片上,贴上载菌体的滤膜,再向滤膜加一滴油,盖上盖玻片(滤膜两面均不能有气泡)。
5、 在荧光显微镜365 nm处观察,DNA为亮蓝色,非DNA为黄色。
6、 数10个视野,每个视野约20个。
N=X*Na*S/(St*V)
N:样品含菌数,个/ml
Na:各视野平均菌数,个
X:样品稀释倍数
S:滤膜滤水面积,cm2
St:视野面积,cm2
V:过滤样品量,ml