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标题:请教管家基因

韩梅梅[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是搞肿瘤的。用actin做内参，发现所有的靶基因在肿瘤中都低表达，有点怀疑，然后把癌组织连同癌旁正常组织切一块下来，免疫组化，就知道actin在肿瘤高表达。我当然不是说在所有肿瘤中，actin都高表达，只是我研究的这种。

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b-actin ，GAPDH，还有28S RNA这三种内参文献比较的结果表明最后一个似乎还比较稳定!
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小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我正在做半定量PCR的课题，也准备用actin做内参。
请问alex119 ：如何自己做内参？我不太懂你的意思。能提供几篇参考文献吗？非常感谢！
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小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我正在做半定量PCR的课题，也准备用actin做内参。
请问alex119 ：如何自己做内参？我不太懂你的意思。能提供几篇参考文献吗？非常感谢！
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不懂[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我正在做半定量PCR的课题，也准备用actin做内参。
请问alex119 ：如何自己做内参？我不太懂你的意思。能提供几篇参考文献吗？非常感谢！

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我觉得biotechniques上很有几篇这样的文章。你查查看，我上网不是很方便，如果要发给你也许要等几天的！所谓自己做的内参其实就是做一个和靶RNA能互相竞争的mRNA（体外合成），所采用的原理仍然是竞争性的PCR，虽然烦琐一点，但是很能说明问题！
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发表于 2011-9-22 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的各位兄台
我是选用定量PCR来显示两个片段的差异的,而且选的参照是其它染色体上的片段,所以设计乐两对引物,可有个问题很苦恼,就是再不同模板浓度时,同是正常人,结果差异很大
有谁能指点我一下吗?或有什么类似的资料推荐吗?
万分感谢,因为我和急,结果不好老板脸色不怎么好看!!!
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大虾米[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的各位老师或师兄师姐大家好，我是学植物病理的，也想要做定量PCR或半定量PCR，现在有两个菌株，一个致病，一个非致病，它们同属于一个种，主要是想要看致病的菌株的量，但问题是我没有这个菌株的特异性标记，不过我知道它的序列，请问我要如何准备实验，还需要些什么条件，要注意些什么问题？
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发表于 2011-9-22 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我试验是提取培养的细胞RNA做RT-PCR，选用beta2-微球蛋白做内参，也是根据参考文献作的，理由是其表达丰度低，做半定量相对可靠。看了不是太能理解的。很想知道有哪十几种管家基因，它们表达的丰度如何。
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coolcool[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我试验是提取培养的细胞RNA做RT-PCR，选用beta2-微球蛋白做内参，也是根据参考文献作的，理由是其表达丰度低，做半定量相对可靠。看了不是太能理解的。很想知道有哪十几种管家基因，它们表达的丰度如何。
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大仙[使用道具]
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发表于 2011-9-22 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是学那种肿瘤的？是不是胃癌的？我要做胃癌的脂氧和酶的方面RT-PCR，用什么做内参呢？急急急！！！
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发表于 2011-9-22 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
To obtain valuable data, it might be better to use /try 3-4 internal controls if possible esp economy available .otherwise, publication is publication, you can get your data published, but---- you know it all. it's just my personal opinion.
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