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标题:【求助】水-乙腈流动相梯度洗脱基线突然升高的问题

阿福[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】水-乙腈流动相梯度洗脱基线突然升高的问题

请教下各位达人，我用waters 的XBridge BEH300 C4柱子，水-乙腈（含0.1%甲酸）作为流动相梯度洗脱分离某种蛋白，不管怎么变梯度，随着乙腈的增高，基线总在进样6min后突然抬起，之后走为一平台，特别是在210nm波长下，这是为什么呢？
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@木木@[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看下你的梯度设置。

是走的空白吗
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阿福[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
进的是蛋白样品
开始用的是0-5min，乙腈由5%增至95%，后来又减缓梯度做了多次，甚至0-15min,乙腈由0增至15%仍然如此，仅在梯度较缓时，254nm的吸收变化不那么陡，210nm一直都是突增
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橘子水儿[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你真牛，帮你分析问题还收钱啊？？
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橘子水儿[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
甲酸比例千分之一还是比较高了，能否将为千分之0.5%?
214nm作为末端，在梯度剧烈变化是基线变化是正常的
建议你先把甲酸降下来，也许色谱柱吃不消，当然实际上酸度的变化也会导致基线的变化
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阿福[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对不起啊，菜鸟不懂如何上图，捣鼓了半天，请高手指点
我的样品要上质谱检测，据说流动相里必须要有酸，有人用甲酸，也有人用三氟乙酸
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阿福[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

色谱柱：waters XBridge BEH 300 C4 (4.6 mm i.d.×250mm)
流动相A：水（含0.1%甲酸）
流动相B：乙腈（含0.1%甲酸）
流速：1mL /min
紫外检测波长：210 nm和254 nm
柱温25℃

红色为254nm，黑色为210nm吸收线，蓝色的是梯度曲线
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gogo[使用道具]
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发表于 2015-10-30 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能系统污染，或者流动相不良。
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发表于 2015-10-30 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你梯度的变化幅度有多大，吸收值的梯度变化有多大？
进针流动相看一下
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假小子[使用道具]
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发表于 2015-11-1 18:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
梯度的变化太厉害了，，出现梯度不奇怪，，而且一个走纯水，，看一个走纯的乙腈，，这样很容易出现问题的，我建议把流动相改变一下：
A:（水-乙腈）乙腈的比例要低点
B：（水—乙腈）乙腈的比例设高点

自己计算比例，，和原流动相对应的梯度时间上的比例基本一致就行
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