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标题:【求助】怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来

大花猫bb[使用道具]
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【求助】怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来

我想做一下液体培养后丝状真菌的扫描电镜。
     实验室的人都是做细菌的,他们是把菌液滴在盖玻片上,等菌液干后加戊二醛固定,然后漂洗,梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法,就是加试剂处理后离心,可是菌丝根本离不下来,14000转都不行,想问一下各位高手:
    怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来?
    干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗?
    漂洗的时候用水还是缓冲液呢?用水的话菌丝应该很容易变形吧?怎样尽量保持菌的形态不变?
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蓝色雨梦[使用道具]
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【回复】

真菌需要用乳酸棉兰染色,显微照相才能看的清楚。不知道你的真菌是在固体培养基上培养的,还是震荡培养的?
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yuanyuan[使用道具]
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【回复】

我是要做电镜,振荡培养
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妮子@[使用道具]
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【回复】

要看菌丝还是孢子?
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n111[使用道具]
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【回复】

其实菌丝不像细菌那么小,一般在光学显微镜下,染色就能看清形态,而且操作简单,菌丝也不会变形。
你用的是电镜扫描处理样本的通常方法,要是必须用电镜的话,你可以试试更换脱水梯度和时间,脱水过程温和一些,变形情况会好转。
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qinqinai[使用道具]
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【回复】

谢谢,是必须要用电镜,因为要观察细胞壁
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huali[使用道具]
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【回复】

可以使用固体培养基培养,盖玻片插片法制片子.
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QQ爱[使用道具]
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【回复】

呃...我讲过了,是想看液体培养基里的菌丝,谢谢
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yayayu[使用道具]
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【回复】

没事,年纪大了,没注意一定要液体培养,不好意思...
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p1900[使用道具]
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【回复】

麻烦再问一下,我同时也做了固体平板上的电镜制片。按文献讲的:从菌落上切琼脂块薄片,然后固定脱水等等。我做完干燥之后,发现薄片不再是平的,变卷曲了,想问下还能用吗?扫描电镜的样品是否必须是平的?
以前没做过,可能问得有点弱,请高手帮忙
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