小中大
TRIzol法抽提总RNA
组织100mg
↓
加1mlTRIzol
↓
匀浆(要彻底,后转至EP管)
(组织匀浆量>100mg时分装1ml/每EP管)
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颠倒混匀10下,室温5分钟
↓
加氯仿1/5体积(0.2ml)(必须按总体积的1/5)
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颠倒混匀10下,室温5分钟
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4℃,离心12000g,15分钟
↓
转上层水相(约400μl)于另一1.5mlEP管中
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加等体积异丙醇(约400μl),混匀室温10分钟
↓
4℃,离心12000g,10分钟
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弃上清
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加冰预冷的75%乙醇(用DEPC水配)1ml
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4℃离心7500g,5分钟
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弃上清,空气干燥5-10分钟(不能完全干燥)
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溶于DEPC水中至20μl(10μl-20μl)
(可在55-60℃水中,<10分钟助溶)