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标题:【求助】病毒RNA的提取

ero11[使用道具]
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什么病毒啊,没有那种可以在细胞或者组织中繁殖扩增的吗?直接提不好提,就看你是不是什么样目的了,只要基因的话,我觉得这样可以.如果是必须在这么少的量下提取那只能再好好想其他的办法了,我用trizoo提副粘病毒,很好用的啊,不过在组织和泄殖腔拭子中提取微量病毒就不是那么顺利了,之后还是用细胞繁殖阔增再提
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细胞毒,病变细胞悬液,上清都可以用TRIzol提,我提完就作一般的琼脂糖电泳,从细胞提取的出现三条带,18 s,28s,5s,病变细胞悬液前两种,上清没有条带,这是我做的结果,虽然上清没有条带,但我做pcr反而是这种效果最好
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TRIzol法抽提总RNA
组织100mg

加1mlTRIzol

匀浆(要彻底,后转至EP管)
(组织匀浆量>100mg时分装1ml/每EP管)

颠倒混匀10下,室温5分钟

加氯仿1/5体积(0.2ml)(必须按总体积的1/5)

颠倒混匀10下,室温5分钟

4℃,离心12000g,15分钟

转上层水相(约400μl)于另一1.5mlEP管中

加等体积异丙醇(约400μl),混匀室温10分钟

4℃,离心12000g,10分钟

弃上清

加冰预冷的75%乙醇(用DEPC水配)1ml

4℃离心7500g,5分钟

弃上清,空气干燥5-10分钟(不能完全干燥)

溶于DEPC水中至20μl(10μl-20μl)
(可在55-60℃水中,<10分钟助溶)
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seagate[使用道具]
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谢谢各位的帮助!
我的标本就是咽喉拭子中要提取出病毒的RNA,由于取回来后冻存了,所以再要接种去繁殖是不大可能了,这么微量的情况下,谁有什么很好的提取方法吗?
实在是没辙了。Dead
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ztonyc[使用道具]
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我最经也在尝试用Trizol 法提取总RNA。
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00无名指00[使用道具]
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同样遇到粪便RNA提取的难题了~~~
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