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标题:【求助】PCR反应体系

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发表于 2015-11-7 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
46XX性发育睾丸疾病先天性卵巢发育不全综合征
电泳结果如下


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发表于 2015-11-7 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第五个点样孔是第四个孔点样时不慎流进的 .
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发表于 2015-11-7 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第二个样本的杂带少了很多了。
继续做64度的退火！！
电泳时上样量减少，要不就把胶做厚一点！减少点样时的交叉污染。
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发表于 2015-11-7 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问酶的浓度不同,怎么确定剂量啊?如2U/UL和1U/UL的浓度时所用量是不是一样呢?
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发表于 2015-11-7 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肯定是不一样的,我所用的TAQ酶浓度是5U/UL.慢慢摸摸量,别着急!会得到一个最适的量的.祝你好运!
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发表于 2015-11-7 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是一个刚进实验室的新手，目前正在做的课题是关于肺癌抑癌基因RASSF1A的甲基化，采用MSP的方法。根据参考文献合成了甲基化和非甲基化的两对引物，在年前的时候实验出现MSP特异性产物条带，结果很好。但后续的重复时，不是没有产物就是出现很多的非特异性条带，我也改动了我的实验体系和PCR条件，但都没有再出现理想的产物条带，很是郁闷，希望前辈高手能够指点指点，不胜感激！
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发表于 2015-11-7 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

标准的PCR反应体系：
10×扩增缓冲液 　 10ul
4种dNTP混合物 　 各200umol/L
引物 　　　　 　 各10～100pmol　
模板DNA 　　　 　0.1～2ug　
Taq DNA聚合酶 　 2.5u　
Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 　100ul
更多关于“PCR反应体系与反应条件”的信息可以查看cuturl('http://www.biomart.cn/experiment/430/457/458/15583.htm')
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