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标题:【求助】ployA加尾法PCR U6引物加什么?

大尾巴[使用道具]
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加尾法只加上游引物,下游用通用的。不过加尾法的u6和茎环的u6是不一样的,有现在成的商品化的,直接买来用就行了。

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两种方法你可以选择用同样的u6,并不是不一样,主要是看你怎么选择
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大尾巴[使用道具]
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是的 谢谢。顺便请教一下战友。普通PCR的内参引物 长度270bp 用来做荧光定量PCR(染料法)的内参 测出CT值13~14 而我的母的基因CT值都是25~29 40个循环,这样的数据可以用吗?

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普通pcr是指扩增mRNA的cDNA?如果是,270bp的片段长度稍微有点长,太长的序列无法保证扩增效率达到最佳状态也就是100%
排除以上问题,你的数据是可以使用的,说明你目的基因表达相对较低
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yayya[使用道具]
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你好,我最近也要做microRNA 的荧光定量,小白一个,有几个问题我想问一下:
1.我看你用takara的试剂盒加尾ployA,是不是试剂盒里就有的ployA,还是这个要自己买的,
2.035A这个试剂盒有通用的引物包含在里面吗?
3.我在网上没有找到通用引物的序列,好像不一样的公司提供的microRNA反转录的试剂盒用的序列都不跟我们说,我们用的反向引物怎么设计呢?还是直接买公司的反向引物,
不胜感激啊
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QUOTE:
原帖由 yayya 于 2015-11-7 14:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你好,我最近也要做microRNA 的荧光定量,小白一个,有几个问题我想问一下:
1.我看你用takara的试剂盒加尾ployA,是不是试剂盒里就有的ployA,还是这个要自己买的,
2.035A这个试剂盒有通用的引物包含在里面吗?
3.我在网上没有找 ...

呵呵
1、有ployA的逆转录试剂盒
2、035a好像是有通用试剂盒的 你可以在宝生物公司的网站里检索到试剂盒说明书,网页版是有中文的书的
3、通用引物序列是没有提供的 你如果想知道,可以送一点去测序
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能否把大鼠RNU6B序列给我发一下,做的比较好的,下游通用引物我自己有。
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ns5fan[使用道具]
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是的 谢谢。顺便请教一下战友。普通PCR的内参引物 长度270bp 用来做荧光定量PCR(染料法)的内参 测出CT值13~14 而我的母的基因CT值都是25~29 40个循环,这样的数据可以用吗?

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我认为可以,还请高手进一步详解。
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