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标题:【求助】random primer与oligo dt 有和区别？

superboy[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】random primer与oligo dt 有和区别？

我是一个刚刚接触PCR的菜鸟，一时弄不懂random primer与oligo dt 有什么区别，还望各位前辈能多多指教，不甚感激！
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cocacola[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我只知道作RT时反映条件不同，万万不可搞混，其余的我也不清楚
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RT合成C DNA引物的选择一般有以下3种：
1 随机6具体引物：当特定M RNA含有使反转录酶终止的序列而难合成全长时可采用随机6具体引物来拷贝M RNA。用此引物合成的C DNA96%源与R RNA
2 oligo dt ：是一种对M RNA 特异的方法，因决大多数真核生物M RNA都有 POLY A结构，故仅M RNA被转录。做RT一般都用他做引物，特异性较强。
3 特异性引物：用含目标RNA的互补序列寡核甘酸做引物，可导致更为特异的扩增长物。
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#问号#[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想顺便问一下：用随机6具体引物，反转录出mRNA 吗？另外它的序列是什么？
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49888[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的大连宝生物的试剂合，他的是 RANDOM 9 MERS 适应于长的或具有HAIRPIN结构的RNA，包括R RNA，M RNA，T RNA等在内的所有RNA的RT。
他的序列是 5 NNNNNNNNN3
不知解释的如何，我也是看说明书的，希望对你有帮助！
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人经验，这两个引物的应用是有讲究的，主要根据RNA质量来决定如何选择。
随机引物由于与RNA的很多地方可以结合，因此对于一些即使已经降解的RNA仍然能够逆转录，具有高敏感性和较低的特异性，特别是当有基因组DNA污染时则不能用随即引物。因此对于RNA抽提质量有部分降解的可以选择用随即引物或合用oligdT。
oligdT则只能与RNA 的3‘端多聚A结合，因此有较高的特异性，但对于那些5’端部分降解的RNA序列则不能完成逆转录。这样在你PCR引物设计在靠近5‘端的目的基因就很可能扩增不出来。因此对于RNA基本无降解的建议用oligdT，已有降解的则用随机引物较好。
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发表于 2015-11-10 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

随机核苷酸引物的原理是这样的：
拿随机六核苷酸引物来说，六个核苷酸每个位置都有四种选择，分别为A,G,T,C,那么六核苷酸的序列理论上来说就有4的6次方种可能，因此六核苷酸引物没有固定的序列，而是4的6次方条序列的总和，在说得明白一点，六核苷酸引物的EP管中装的是4的6次方条核苷酸序列！！！
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seagate[使用道具]
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发表于 2015-11-10 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在思考这个问题，看了这个之后，我理解的更加深刻和清楚了，谢谢各位。
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