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我最近做PCR也遇到这样的问题,没有给模板的NTC也是有扩增曲线,而且曲线与样本的差不多,CT值在35左右。但是我10月做还是好的,11月就出了问题,突然出的问题。到现在还没解决。
我更换过引物(重新合成),更换过试剂(新开的试剂盒,也更换过不同批号的),更换过配置体系的场所(换了3个场所),都会出现曲线。最后我怀疑是我的ABI7300出了问题,换了7900,刚换的第一次,没有这个现象了。我以为好了,但是第二次就又出现这个现象了。。7900是全部用的96孔板封板完成的PCR。如果说7300气溶胶污染,那还有可能,毕竟有时候是用8联排管做的。但是7900是没有用8联排的。
最近一次换了新批号的试剂盒在7900完成的,又好了一次,但是这个批号的试剂盒做第二次又不行了。真是要崩溃了。还是怀疑污染。
我们PCR室是几个组共用,其他组也出现过这个问题,重新合成了反向引物,是增加还是减少了一个碱基吧,据说是好了。抽空我去问问人家是怎么回事。
忘记说我的是探针法