颗粒计数器

大家好！我现在想做下湖水样品细菌计数，有做过细菌计数的大神们想向你们请教一下，细菌计数最简单有效的方法是什么：荧光显微镜计数（DAPI染色），流式细胞仪还是平板计数，或者是其他什么方法。关键是想简单，比较省事而且方法可靠性高以后发文章不会质疑。

要是方便的话，感觉平板计数较好些，应为计数器来没那么多麻烦，要是条件允许的话，其他方法也可以！

湖水样品，最好是DAPI 和 FC。 平板太不靠谱，很多unculturable的

我用了dapi在400倍下计数，细菌是不是特别小，一个小点？

40倍吧， 40倍下 差不多 就是一粒沙那么大那么大

物镜40倍， 目镜10倍。嗯，我计数的是沙粒大小的。，谢了啊

看了个文献说显微镜计数比较好。流式细胞仪也不错，其他方法不推荐。

但是 细胞和细菌一起，怎么计数好呢？好纠结。。。

你有DAPI具体的方法吗？能给我一下吗？

细菌显微镜计数方法
1、        取1 ml样品，超声40 s，低功率，0.2 cycle/second。
2、        加200 微升，100 微克/ml DAPI，暗处染色5 min。
3、        用0.22 微米，黑色聚碳酸酯膜过滤收集，然后用无菌水冲洗两次。
4、        加一滴荧光显微镜油于载玻片上，贴上载菌体的滤膜，再向滤膜加一滴油，盖上盖玻片（滤膜两面均不能有气泡）。
5、        在荧光显微镜365 nm处观察，DNA为亮蓝色，非DNA为黄色。
6、        数10个视野，每个视野约20个。
N=X*Na*S/(St*V)
N：样品含菌数，个/ml
Na：各视野平均菌数，个
X：样品稀释倍数
S：滤膜滤水面积，cm2
St：视野面积，cm2
V：过滤样品量，ml