【求助】求荧光定量PCR 仪ABI 7900T 软件SDS 2.3 或2.4

PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求荧光定量PCR 仪ABI 7900T 软件SDS 2.3 或2.4

11 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求荧光定量PCR 仪ABI 7900T 软件SDS 2.3 或2.4

伊莎贝拉[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79367
精华 0
积分 253
帖子 226
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2015-11-11 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

提的总RNA想检测一下，不想跑甲醛变性电泳，想用琼脂糖电泳代替。有些细节想请教一下，请做过的朋友指导一下。
1、琼脂糖的浓度
2、电泳缓冲液用什么，怎么配
3、加样缓冲液怎么配
4、RNA点样的量是多少
5、EB什么时候加，是直接加在胶里还是跑完后再染色
6、电泳槽要用DEPC处理吗，会不会电泳的时候RNA降解了
7、电压是多少
8、还有什么注意事项
暂时就想到这么多了，谢谢指教

Darcy[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 71238
精华 1
积分 420
帖子 495
信誉分 102
可用分 3271
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态离线

发表于 2015-11-11 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我上次电泳总RNA时用的是琼脂糖凝胶，感觉效果还行。在这里我把我的用量给你，仅供参考！
琼脂糖浓度：1％
电泳缓冲液：0.5％ TBE
加样缓冲液就是溴酚兰
RNA上样量我用的是5ul(与加样缓冲液比例为5：1)
EB在倒胶时候加（同PCR产物的电泳程序）
电泳槽无须用DEPC水处理
电压我一般用100V
电泳半小时后可得到清晰的三条带！

ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2015-11-11 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我上次电泳总RNA时用的是琼脂糖凝胶，感觉效果还行。在这里我把我的用量给你，仅供参考！
琼脂糖浓度：1％
电泳缓冲液：1/TAE
加样缓冲液就是溴酚兰
RNA上样量我用的是5ul(与加样缓冲液比例为2：1)
EB在点样时加,但要注意EB的量不能太大
电泳槽无须用DEPC水处理
电压我一般用100V
电泳20分钟后可得到清晰的二条带！
28S:18S的比例为2:1时为好
但要注意EB的量不能太大!!!!!!!!否则会出现倒带,或者看不到.

Darcy[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 71238
精华 1
积分 420
帖子 495
信誉分 102
可用分 3271
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态离线

发表于 2015-11-11 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问TAE或TBE是用DEPC处理过的水配吗？溴酚兰呢？难道和跑DNA一样？那在跑的过程中不降解吗？

ujne[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 117905
精华 0
积分 359
帖子 377
信誉分 100
可用分 2711
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态离线

发表于 2015-11-11 16:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.TAE或TBE用普通的双蒸水配制就可以。
2.溴汾蓝可以买到，不必自己去配制。
我跑RNA电泳是这样的：
1. 琼脂糖浓度1%
2. 1×TAE电泳缓冲液
3. 溴汾蓝用3微升，RNA用1微升（RNA的体积要根据你溶解RNA时的所用液体量而定，不可生搬硬套）
4. EB在倒胶的时候加
5. 电泳槽不用处理，电泳液也不必新鲜配制
6. 我用180伏电压（我的电泳槽大概15厘米长，约12伏/厘米）、时间为8分钟。
其实，跑RNA也没有什么特别的，我的经验就是要电压大一点，时间短一点。用大电压，从来没有遇到降解的情况出现。呵呵！一般是看到清晰的3条带，少数是2条。

蒲公英[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 70433
精华 0
积分 232
帖子 203
信誉分 100
可用分 1761
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态离线

发表于 2015-11-11 16:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

新手开始提总RNA结果总是不理想，求助原因。下面共5张图，都是提取的SD大鼠的肝脏。第一张：配制的是2%的琼脂糖凝胶，从左到右，前6个上样孔RNA的浓度是3000多，上样量分别是1ul的溴酚蓝加0.5ul、1ul、2ul、3ul、4ul、5ul的RNA溶液，后5个上样孔RNA的浓度是1100，上样量分别是1ul溴酚蓝加0.5ul、1ul、2ul、3ul、4ul的RNA 溶液。