小中大郁闷之极，昨天使用TAKARA的试剂盒提取EDTA抗凝血的全基因组DNA后，用分光光度计检测居然和空白对照的结果一样，下面我把相关的情况说一下，希望各位高手能够帮我找找原因。
1.我的血标本保存时间比较长，是在采血后于4度保存了一个星期，然后放置-20度左右冻存了2个月；
2.使用的是takara试剂盒，其中有几步离心的步骤，由于准备不充分，在离心后放置了10-20分钟再进行后续的步骤
3.70％乙醇是临时急配的
4.溶解DNA的是双蒸水
5.提取完毕后溶解之前，我在离心管底感觉隐约是能看到一点沉淀的
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1. 保存时间：4度1周，-20度两个月的保存时间算是短的了，而且不会对质量有致命的影响。而且就有些方法而言，冻存一段时间的血液提取起来更方便一些。-30度下保存了3年的血我们提取的效果也还不错。
2.试剂盒的选择：我看了Takara的试剂盒的操作说明，结合我们现在经常用的一些试剂盒，感觉就是怎么这么憋屈！呵呵！一次性处理的血量少不说，还得那么小心翼翼的，郁闷啊，打死偶也不会用这种盒子。推荐Promega的A1120或A1125，原理和Takara的类似，操作无需小心谨慎，我可以免费提供改良版的操作说明，一次可以处理冻存血600-750ul、新鲜血500ul，成功率近乎100%，60ul溶解后的浓度在100-300ng/ul，1.7-1.9之间。或者可以选择过柱子的试剂盒，MN、Qiagen什么的都可以，看你有多少钱了，只是产量低一些。
3.实验过程中有断档，对人血DNA提取来说一般不会有太大的影响，我们经常在加完溶液2后去休息一会，呵呵。当然试剂盒本身决定的。
4.DNA沉淀溶解的溶剂最好用1*TE，pH8.0，利于溶解，而且利于长期保存。双蒸水就不推荐了，问题多多。
5.沉淀能看到的话，那就不算太少了，60ul溶解完全的话，估计在30-50ng/ul。这样的最好用40ul去溶解。我们自己提取时，沉淀大小通常在0.5-1平方毫米左右的面积。
6.对于提血试剂盒，不要拘泥于它的操作说明中的量，有时候里面给的太保守了。
