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试剂盒的费用太高,我想试用一下KI法
提取步骤如下:
1、取EDTA2Na2 抗凝血200μl , 加入到1.5 ml Ep管中,加1.0 ml无菌重蒸水, 10 000 r /min离心3 min,弃上清;
2、加5 mol/L KI溶液40μl,旋涡振荡混合30 s。再加0.9%NaCl溶液100 μl, 氯仿/异戊醇( 24 ∶1,v/ v)混合液150μl,振荡混合30 s。10 000 r /min离心5 min,吸取200μl上清液,转移到另一个Ep管中;
3、加异丙醇120μl,轻轻混匀, 10 000 r/min离心5 min,弃上清。
4、加无水乙醇1.0 ml, 10 000 r/min离心5 min。弃去无水乙醇。加50μl无菌重蒸水使其溶解, - 20℃保存备用。
在加入异丙醇和乙醇后均未见沉淀,电泳也未见条带,求助大家可能是在哪一步出了问题。
另外,我还有一部分血标本,4度放置一周后-20度保存半年,用KI法提取可以吗?