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1：为什么接毒细胞孔中细胞大量死亡，基本无病毒稀释度的差异？是否是我的病毒稀释度还是不够？所以导致接毒细胞孔中的细胞成片死亡？或者还是观察时间过晚，病毒已经完全扩散开来了？
可能原因：
A. 琼脂温度太高了。
B. 该细胞系不适合做空斑
C. 观察时间比较晚（一般来说，第一次做，应该每隔12h观察一次）
D. 其他原因。
2：我搜了搜以前的帖子，看见有些用双层琼脂，这个是否是因病毒不同而异？
这个和病毒无关。加双层琼脂虽然麻烦些，但是有利于固定住空斑形状。
3：我想下一次实验，用营养琼脂覆盖细胞，但不加加中性红，每天观察细胞，待细胞出现病变后，在直接在琼脂上加中性红去染细胞，但不知道，在这种情况下，中性红使用浓度多大合适？染色多长时间？
你的预试验，应该重复这次空斑接毒的结果，将病毒按空斑方法同样稀释，每隔12h观察一次，体会细胞病变出现的时间、病毒的稀释度等等。
然后在下次做的时候，每个稀释度接种两个板。一个六孔板只做接毒试验，另外一个六孔板做空斑试验。如果再出现类似问题，肯定是某个环节有问题了。
你可以换换用其它染料。
