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标题:【求助】24孔板如何能铺得更均匀？

cbou876[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我同意楼上的，最重要的前提是你要保证制成的细胞悬液是均匀的。这句话包含两层含义：1，消化细胞一定要充分；2，往plate里面接种时一定要注意混匀细胞悬液。
但个人意见还是前者最重要，我似乎没有遇到你所说的情况。回头发一张细胞悬液的涂片给你看看。
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qqshepherd[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的体会是 1.种板前尽量混匀后吸取 2.接种时以中等速度、匀速、近孔中央一次加入。
3.接种完毕后，可在超净台内静置10-20分钟，待所有细胞自然沉降后，放入培养箱。
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jingling845[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

接种前，将细胞消化成单个，分孔时，将细胞混匀，分装以后同一方向摇动，摇匀即可！
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remonte[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的方法是：
现在24孔板中加入培养基，种细胞悬液时螺旋式加入，种完后盖上盖子，用手掌对着一横边和一纵边轻轻拍打，然后再对着拍打过的横边和纵边的对角轻轻拍打，切忌四个边都拍打，这样细胞很容易聚到中间。接着放到培养箱中不用管它，第二天看一般都比较匀。
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人觉得好像接种没有那么玄乎吧，我都是随手把细胞悬液注入盘底即可，似乎没有关注过接种是否均匀的问题，下面是一张细胞悬液的计数图片，细胞悬液是纯手工机械打造，没有使用任何消化酶。


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2015-11-14 21:37
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
方法两个：经验之谈
1、十字法。看你是轰动的幅度等会影响。
幅度不要太大，就是不要太快。而且，可以把板子几乎立起来，用劲抖动，按照十字形顺序进行。
切记不可十字晃动太快，不然本来均匀的都会聚到中间。或者不小心，就是聚到边缘。一般聚在中间居多。
2、现在板中加部分培养基，铺平板底，这点很重要。然后再散在的滴入细胞悬液，最后用十字法轻轻、稍微轰动。
最后，切记，均匀铺板后要慢慢的移动。
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sunbent[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对于大一点的孔板，用十字的方法操作可以把细胞铺得均匀；
但是对于48孔板、96孔板用十字法，效果好像不是很让人满意的
我每次把细胞分到每孔以后，用手指轻轻的敲板的四侧（动作要轻）就可以了，效果不错……
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standbyme[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

沿着孔壁稍慢加入即可，就铺的很均匀了。
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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

孔板内的细胞铺板后不均匀主要是由于细胞铺板后还没有沉积的时候，从超净台“走”到孵箱的过程中孔内的液体漩涡造成的。所以孔面积越大，液体越多，越容易形成漩涡，细胞越容易成团。因此，96孔等小孔铺板后千万不能十字晃动，越晃细胞越不均匀，只要走动时慢点就可以解决。6孔，培养皿等打孔板可以等细胞沉积后在挪动或者在孵箱上十字晃动后再挪到里面就可以解决！
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2015-11-14 21:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近铺了两张231细胞的24孔板，发现每个孔都是中间有一堆细胞聚集，周围的比较稀疏，这样会影响我后面的实验，请教如何使24孔板能铺得更均匀些？

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铺完之后划8字或者十字吧。铺的时候吹在培养板的壁上，枪头与水平角度小一点。
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