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标题:【求助】吸光度值A可以是大于1的吗？

bling[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没关系的，任何事情只要做了就会有收获的，哪怕是失败的事情。
任何失败的事情，只要不把责任推脱给外界因素，而是从自己身上找原因，那么你永远没有失败！
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leifengta[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“MTT只是一个简单的实验，说明的问题也很有限，有些不值得。别的实验可以认真一点。”
确实如此，我也觉得不值，人家只做一次就出结果，我都做了十多次了，结果还是不尽人意，我真的好想哭，每次都是0.0几！
我不赞成这种做法，我的ＭＴＴ做了两个月！
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leifengta[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为做研究是很严肃的事情，况且从ＭＴＴ里可以得到很多意外的收获，而且ＭＴＴ本身可以说明很多问题，看你怎么分析结果了！
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发表于 2015-11-16 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有加入ＤＭＳＯ的量要和最初反应时液体总量相同才有可比性，要不然自己都说服不了自己！如果你加了药或ＭＴＴ后液体总量是２００微升，那么加ＤＭＳＯ的量就是２００微升，这样才可以更好地排除干预因素以外的影响！
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发表于 2015-11-16 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 leifengta 于 2015-11-16 15:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

还有加入ＤＭＳＯ的量要和最初反应时液体总量相同才有可比性，要不然自己都说服不了自己！如果你加了药或ＭＴＴ后液体总量是２００微升，那么加ＤＭＳＯ的量就是２００微升，这样才可以更好地排除干预因素以外的影响！ ...

兄弟，好像没有哪本书有这么强调的哦！MTT的原理也不是这么认为的。
另外，固然MTT是一个很好的药物初步筛选的实验，但是，它的原理就限制了它能说明的问题的有限性。
为学当然应该严谨，但是，也需要灵活，固然是不依规矩不成方圆，如果一味的因循规矩，只能成方圆，你就做不了其它东东了，比如说狼牙棒、子母鸳鸯钺、判官笔。呵呵，说笑了！ Tongue
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发表于 2015-11-16 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

都是可以的，不过我个人认为还是应该用570nm。如果有双波长的话，再加上参考波长603nm。
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发表于 2015-11-16 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天我又重做了一板，这回我没用空白对照调零，测出的结果吓我一跳，原来我的空白对照都是0.4～0.6，实验组数值也和这个很接近，怪不得每次用空白调零，测出的吸光度值都那么小，甚至为负，这下我开始怀疑我的空白对照孔了，做空白对照时我是这样做的：除了不加细胞其余都和实验组一样，我这样做对吗？为什么会出现这样的结果？MTT孵育4小时吸出后，还需要用PBS或其它什么试剂冲洗一下培养孔吗？我的空白孔每次加入DMSO后也会出现紫色，实验组出现紫色是因为甲瓒结晶溶解的缘故，而空白也出现这种颜色，是什么原因：培养基、药物还是DMSO?
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发表于 2015-11-16 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我看你的空白孔测出的值是0.05，你是怎么设定空白孔的？如果我的空白也是这个值，那我想我的MTT实验也差不多快成功了
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发表于 2015-11-16 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据站友所说：另外，不知道你最后做MTT孵育的时候是否用含血清的培养基，理论上孵育时的应该用含有2-8%左右血清的培养液孵育，有利于细胞吞噬MTT并将其转化。
我特地做了一个对照，一组用含1％血清的培基进行MTT孵育，另一组用10％的，4小时后，高血清组颜色为深紫色，低血清组的为深黄色（比MTT深点）一开始我还很高兴以为找到原因了，没想到加入DMSO后，高血清组的颜色反而没有低血清组深，一测吸光度值还是如此，高血清组的值不如低血清组大，差别还挺大，这种现象不知该如何解释？
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发表于 2015-11-16 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zzzz 于 2015-11-16 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

根据站友所说：另外，不知道你最后做MTT孵育的时候是否用含血清的培养基，理论上孵育时的应该用含有2-8%左右血清的培养液孵育，有利于细胞吞噬MTT并将其转化。
我特地做了一个对照，一组用含1％血清的培基进行MTT孵育，另一组用10 ...

本底孔怎么能做出紫色来呢？这很奇怪啊，除了你配MTT的问题，我想不出
其它问题了。
MTT母液用PBS配，过滤除菌，贮存于－20度，可以保存至少2周时间(文献说两周)，其实可以更长的时间。
用含血清的培养液配MTT，必须是现配的，即现用现把MTT母液加在培养液中，然后添加到孔里，血清浓度必须低于10%；你用的MTT是现配的吗？
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