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标题:【求助】吸光度值A可以是大于1的吗？

zzzz[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是用0.01M的PBS配MTT的，而且时间一般不超过一周，一般是提前一天配，不过我把它放到－4度了，这样有影响吗？曾经有人告诉我，说培基放久了会有沉淀，也会影响吸光度，设空白孔是不是就是为了排除培基、药物对吸光度的影响，我的空白设置有误吗？可我的空白孔确实是有颜色的，而且每次做都有，我一直以为是培基和药物造成的，不是吗？还有，青衫，你测出的空白孔的值大概是多少？
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niangao1980[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的空白孔怎么会有颜色呢？这很奇怪。我做的空白对照孔平均OD=0.05。波长为570nm。
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发表于 2015-11-16 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

和大灵通的差不多啊！
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发表于 2015-11-16 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的空白是除了不加细胞其余都和实验组一样，不知大灵通你是如何设空白的，进行药物干预时，空白孔要不要也加药，最后加MTT和DMSO时，空白孔要不要加？我已经糊涂了，不知怎么找原因了？我的空白孔的吸光度值比实验孔还高！
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niangao1980[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可真实在！空白对照孔里面只要最后加DMSO其实就可以。肯定和也加药，再加MTT，然后加 DMSO效果一样。空白对照孔里面加药也是白白浪费，你有的是药么？那还不如分给我点，我正穷着呢。呵呵。当然，正规操作是要除不接种细胞外，和实验孔完全一致了呀。青衫兄，你的意见呢？
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发表于 2015-11-16 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天特地又做了这样一个实验，12个空白孔都不加细胞和药物，然后分成两组，一组只加培基和DMSO,另一组除了培基和DMSO外，在加DMSO前也同样加了MTT孵育，结果两组空白孔吸光度值没有多大区别，而且今天加入DMSO后，所有的空白孔均为无色，吸光度值也一下降到了0.12～0.13之间，比原来的0.4～0.6少了4倍左右，真的很奇怪，难道药物对吸光度值影响这么大吗？那我 的实验组的结果还真不知道是真有那么多活细胞还是由于药物残留产生的呢？
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发表于 2015-11-16 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有还有，为什么同一台酶标仪，同一份样本，间隔不同时间测出的值也有很大区别，不同波段，实验组的值差别很大而空白孔的值却相差无几，是不是酶标仪有问题呀？
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bling[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怀疑你们的酶标仪有问题，你可以同其它实验室的酶标仪比较一下。
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niangao1980[使用道具]
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发表于 2015-11-16 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过的MTT空白值都是几乎为0啊，你的空白孔是怎样设的？我是加入同样量的DMSO.问题是不是你的培养板有问题或是空白设置有问题。请问你具体是怎样设的？
用同样方法处理过得板子直接加同等量的DMSO就可以了。
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发表于 2015-11-16 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做过很漂亮的MTT结果，随浓度的变化，梯度在肉眼下都很明显。当时的照片没保存下来，只是作预试验的有一张贴给你看吧，上边是培养基没作MTT,（为了节约）下边棕色的是，深浅不一（与药量有关，只是浓度没设计好，梯度美出来丑死了）首先要排除是仪器的原因，我感觉你的方法有问题，看身边有没有前辈做过。


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2015-11-16 15:31
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