液相色谱 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】柱子在甲醇-三氟乙酸体系下为什么寿命这么短?

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】柱子在甲醇-三氟乙酸体系下为什么寿命这么短?

kswl870[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77250
精华 0
积分 559
帖子 755
信誉分 101
可用分 4621
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
1
 

【求助】柱子在甲醇-三氟乙酸体系下为什么寿命这么短?

C18柱,5um,工作流速0.8ml/ml,强溶剂为添加0.1%三氟乙酸的甲醇,样品为多肽,柱压在180bar左右,新启用的柱子在进样20-50针以后样品的峰形就变得很差了(但是用其他的分离体系如缓冲盐体系走样品还是好的),无法达到基线分离要求,请问这是怎么回事呢?是柱压高的原因吗,还是因为三氟乙酸的原因?望不吝赐教!
顶部
vera+[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
2
 

个人感觉不是三氟乙酸的原因,是样品脏的原因。
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3
 

考虑一下 多肽与TFA之间是否有影响。
顶部
kswl870[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77250
精华 0
积分 559
帖子 755
信誉分 101
可用分 4621
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
4
 


QUOTE:
原帖由 vera+ 于 2015-11-23 16:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

个人感觉不是三氟乙酸的原因,是样品脏的原因。

样品纯度很高
顶部
SO2[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118006
精华 0
积分 355
帖子 369
信誉分 100
可用分 2696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
5
 
用流动相稀释一下样品  看看有沉淀没有
顶部
kswl870[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77250
精华 0
积分 559
帖子 755
信誉分 101
可用分 4621
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
6
 


QUOTE:
原帖由 SO2 于 2015-11-23 16:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
用流动相稀释一下样品  看看有沉淀没有

样品本身是用流动相溶解,且浓度并不高
顶部
SO2[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118006
精华 0
积分 355
帖子 369
信誉分 100
可用分 2696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
7
 

那有可能是三氟乙酸本身的问题
我知道三乙胺比较伤柱子,是因为三乙胺的溶解性不好,容易伤柱子
三氟乙酸就不太清楚了
顶部
kswl870[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77250
精华 0
积分 559
帖子 755
信誉分 101
可用分 4621
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
8
 
问题仍未解决,详细情况如下:
色谱条件:A相:0.1%TFA-水;
                    B相:0.1%TFA-甲醇;
流    速:0.8 ml/min;
压    力:160(新启用时)-180bar(使用一段时间后)左右(色谱柱带有在线过滤器);
样    品:多肽,面积归一化纯度≥98%;
一、现象
保证分离度≥1.5时以上柱子可正常使用的次数:约50个样品左右;
二、采取的办法
1. 新柱子加保护住,无效;情况和未加保护住仅使用在线过滤器的情况一致;
2. 将两相中TFA加量降至0.05%(pH=2.3),无效;
3. 向两相中添加0.1%三乙胺(pH=2.3),无效;
顶部
TNT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75639
精华 0
积分 455
帖子 610
信誉分 100
可用分 3826
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
9
 
流动相的是多少?这个跟三氟乙酸没什么关系,三氟乙酸应该是起对离子的作用吧
顶部
ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
10
 

我看会不会是柱头堵住了啊。你的样品是不是大分子物质的含量比较高啊?能不能用0.22um滤膜过滤下啊?
顶部