生物质谱 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】质粒已经测序确认开放阅读框内序列没问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  2/2 ‹‹12
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】质粒已经测序确认开放阅读框内序列没问题

女儿情[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 131730
精华 0
积分 1740
帖子 919
信誉分 100
可用分 5956
专家分 0
阅读权限 255
注册 2015-2-4
状态 离线
11

发表于 2015-11-24 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

兄台，你看我这个分析的对不对，我的上样缓冲液里没有加β-巯基乙醇，但是目的蛋白氨基酸序列里含有半胱氨酸，是不是会形成二硫键使目的蛋白没有完全打开，最终导致跑出来的条带偏小？？？
顶部
哈密瓜[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 128271
精华 0
积分 2135
帖子 1149
信誉分 100
可用分 7083
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-28
状态 离线
12

发表于 2015-11-24 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

如果是分子间形成二硫键，形成二聚体或多聚体，分子量会偏大；如果是分子内形成二硫键，分子量不变。
顶部
malong[使用道具]
一星
Rank: 6Rank: 6


UID 129814
精华 0
积分 3179
帖子 1898
信誉分 100
可用分 10775
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-20
状态 离线
13

发表于 2015-11-24 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

学习了，不过分子形状对分子量大小也有影响吧，分子内形成二硫键应该体积变小，是不是分子量要相对小些？
顶部
hcy517[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 128273
精华 0
积分 2933
帖子 1725
信誉分 100
可用分 10050
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-28
状态 离线
14

发表于 2015-11-24 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

你好，正在做原核表达，想请问一下表达载体应该怎么选择尼？后期是要用纯化目的蛋白做抗体的，pET-22，pET-28，pET-30，我应该怎么选择尼？
顶部
danzi[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 130799
精华 0
积分 1937
帖子 1033
信誉分 100
可用分 6443
专家分 0
阅读权限 255
注册 2015-1-8
状态 离线
15

发表于 2015-11-24 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

最近做表达，也出现了这个问题。蛋白一部分上清表达，一部分包涵体，上清为20KD，包涵体尿素溶解后只有14.用的PET28A载体，测序没有问题，实在不知道什么原因了
顶部
 15  2/2 ‹‹12