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标题:对溴乙锭用量的一点看法

ffaa[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反复用了5次，当然应该是每次融化的。因为他说“每次倒胶前加EB”。


而且，切除原DNA聚集带。
每次加EB时，我也疑惑，这样EB的量不就象楼上所说，会很宽的。又增加了毒性。
谢谢你提供的信息，以后，我也只加一次看看。这样岂不又省琼脂糖又省EB,还降低了毒性。
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HOT兔[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是做多态性的，因最后胶不够，我曾做过两次重复用胶，不过我没有融了加EB，我是看完结果后，再放入电泳槽，把电压调大（200-300v），直到条带都进了水里，再重新用，效果差不多。溴乙锭用量大些没关系，至于说会升华，我看未必，我用的胶是医院买的做乙肝用的试剂盒带的华美公司胶，1g/支，里面含很大一颗溴乙啶，直接加热到沸腾，然后灌胶，效果都挺好。
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boom[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原来你们都这么省啊。会不会影响电泳结果啊
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发表于 2011-9-27 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
回复楼上：我每次用胶的时候不是用一整块，而是根据样本数切孔，但是做完以后不回收。

请问，你一块胶反复用的次数如何确定？

[ 本帖最后由 阿拉蕾 于 2011-9-28 15:15 编辑 ]
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阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-9-27 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
回复楼上：我曾经在书上看到说EB也会随着电场泳动的，如果象你那样做，会不会看不见条带或太淡呢？  

[ 本帖最后由 阿拉蕾 于 2011-9-28 15:15 编辑 ]
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阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-9-28 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室是先跑电泳后染色的,这样虽然费胶,但比较安全.EB是配成10mg/ml的储存液,染色时滴一两滴到水里,变红就行,染色时间是根据红的深浅定的,深的话就少一点,浅的话就多一点,一般不超过十分钟,不然背景就很深了.不过背景深的话,可以在水里泡一段时间,这样背景就变浅了,条带很清晰.
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微笑的海豚[使用道具]
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发表于 2011-9-28 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好像说EB在高温下会升华，这好像比较危险^_^
关于危险，最形象的是，我们一个同事，她们实验室发生过一件事情，原来实验室在老楼，有老鼠，有时他们随便将胶放在垃圾桶中，有一次老鼠啃了一块胶，结果，当场毙命。。。。从此后，他们所有的人都视EB为大敌，^_^，这个是真实的故事
而且，的确EB在电泳的过程当中是要泳动的，泳动的方向与样品正好相反，是往负极跑，这样的话，胶当中的EB含量肯定都已经下降了，每次不还要补充EB吗？
我觉得还是不用这样节省的好，毕竟身体是革命的本钱啊^_^
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发表于 2011-9-28 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在国内做课题比较难，在经费紧张的情况下，我们很多研究生不得不“明知山有虎，偏向虎山行”。
危险性就不多说了，只希望大家都能尽可能规范操作，最大程度的保护自己！
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发表于 2011-9-28 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
EB也不是那么可怕，我听一个老师说他的一个学生把手（没带手套）直接伸到EB溶液里捞胶的，况且EB见光会分解掉一部分。当然我们也要注意毕竟可以致癌，只是要用一颗平常的心去对待，不要搞的实验都不敢做了。  
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微笑的海豚[使用道具]
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发表于 2011-9-28 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
EB在高温下会升华,反复应用肯定对身体不好的
不过现在有goldview这种荧光染料，据目前的研究来看没什么毒性，效果也相当不错，我们实验室已经基本不用EB了，goldview 的单次成本要高点，但是为了身体也是值得的  
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