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标题:【求助】HPLC检测是两个分得比较开的峰,但是制备...

PINK[使用道具]
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发表于 2015-11-26 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】HPLC检测是两个分得比较开的峰,但是制备...

还有一个到哪里去了?
样品变化了?
被制备柱子死吸附了?!
奇怪啊.望高手指点,..
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seagate[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1  分析柱分的怎么样？分离度有多少？是不是比较小．
２　是不是放大的时候出的问题
３　分析的填料和制备的填料是一家的吗？
　   应该是两个到一起了．
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duchy[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分析柱C18，梯度洗脱40%-100%   25min  出峰时间14min 。
制备柱C8。
样品分离前，主要的峰出峰时间是20min，还有一个比较小的峰，基本上是在14min 左右。
分离后，只有一个比较单一的峰，但是是14min 。而原来的多组分的峰，就不见了。
几次下来，就剩下一个峰了。。。。。。
大家说，是不是我的物质被C8柱子吸附上去了呢？！
如果是这样的话，怎么才能够把它洗脱下来，用什么溶剂对C8柱的损伤最小。谢谢
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Darcy[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您用C18分析都不会吸附的，C8制备怎么会吸附？？
分离后的样品检测过吗？您所说的分离后只有一个单一的峰(14min)是什么意思？指的的是制备所显示的？
如果是，那么我觉得是您从分析的到制备的放大出问题的，您所用的洗脱梯度太大，而时间又太短了！两个峰并在一起了
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duchy[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
吸附的可能性太小，主要是柱子问题吧。顺便问一下，C8柱在什么仪器上使用？压力多少？
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ero11[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很可能是被吸附了，你的物质属于有吸附的物质
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
若制备后，再用分析测定，发现没其他峰.只能考虑若被吸附,那可能是色素
在制备过程中，只有一个峰,确实很奇怪.应该是制备条件不好，没有得到分离.
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eor[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能原因：你的洗脱液极性刚好介于两个成分之间，14分那个刚好洗出来了，20分那个还没达到。试试提高极性看看。
听回音。
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zbs[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lz, 你用C8制备后的组分经过C18分析柱后,发现20分钟出峰的组分和其他组分都被除去了?
死吸附的可能性是存在的. 你如果在C18柱上的分离结果不错,首先应当考虑使用C18来制备.因为没有事先经过C8分析,制备时选用C8,由于没有分析结果的指导,对制备结果较难预测. 如果证实在C8上目标物吸附很强,你很有可能需要更换流动相的有机溶剂提高对目标物的洗脱能力,在制备上这样摸条件代价太高了.
从另一个角度看,你可以利用这种现象通过C8预柱除掉14min出峰的杂质,然后再想办法分离出20min出峰的目标物.

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xuuuu[使用道具]
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发表于 2015-11-26 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哈,我终于知道为什么公司的资料强调我们的仪器可以做到从分析到半制备到制备都可以线性放大了,色谱图几乎没有变化,方便收集和节省时间,关键是节省样品和流动相啊!
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