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标题:【讨论帖】PCR问题

sunbent[使用道具]
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发表于 2015-12-1 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HLA的郁闷啊！
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2015-12-1 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是一个新手，最近请公司帮我设计了3个引物做RT-PCR，请高手帮我看一下，谢谢！
这是3个引物的具体情况：
目的基因：脂蛋白脂酶 lpl引物设计结果来自genebank序列文件: NM_012598.
原序列总长度为 1425
引物总数有 2 对
第 1 对引物
5'->3' 408 CAGGTTCATCAACTGGCTGG 427
3'->5' 888 GAAACTCTTTCCCGAGACGG 907
第 2 对引物
5'->3' 410 GGTTCATCAACTGGCTGGAG 429
3'->5' 890 AACTCTTTCCCGAGACGGAC 909
以下为内参照：
beta-actin引物设计结果来genebank自序列文件: NM_031144
原序列总长度为 1128
引物总数有 2 对
第 1 对引物
5'->3' 655 GTTGCCCTAGACTTCGAGCA 674
3'->5' 885 GTTGTGTCACGACAGACCAC 904
第 2 对引物
5'->3' 718 TATGAGCTGCCTGACGGTCA 737
3'->5' 948 CTAATGACGGGACCGAGGAT 967
3磷酸甘油醛脱氢酶GAPDH引物设计结果来自序列文件: X02231
原序列总长度为 1002
引物总数有 1 对
第 1 对引物
5'->3' 282 GGAGTCTACTGGCGTCTTCA 301
3'->5' 512 CCGAGTACTGGTGTCAGGTA 531
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2015-12-1 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

please:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=491884&sty=1&tpg=2&age=0')
thanks
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发表于 2015-12-1 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，请问有没有分析RT-PCR的凝胶成像的软件？亮度扫描的。
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发表于 2015-12-1 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求教，检测SHP-1、SHP-2的引物是什么，请指教
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idea2011[使用道具]
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发表于 2015-12-1 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问PCR最后一步72度若干分钟是必要的吗，就是在循环结束后仍然延伸一段时间。因为我最近用文献的PCR引物和条件就是P不出来，文献所提供的程序没有最后这一步的延伸，而是循环结束后直接结束，请问这有影响吗？
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iii_ii[使用道具]
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发表于 2015-12-1 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提取人外周血基因组DNA纯度的问题,需提取标本量较大,如何解决?
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发表于 2015-12-1 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请大家帮忙：我的目的片段是560BP，我用62度退火总扩出一条很亮的带，没有其他任何杂带。我开始以为是目的片段，后用MARK一点，发现是目的条带两倍的大小，怎么会这样，大家帮帮我。我急。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2015-12-1 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我要扩3768BP的片断，CDNA已经得到，不知道这么大的片断，扩的出来吗。
还有，即使扩出来了，这个片断能装到我的载体中去吗，我的载体是5。6KB大小的。望各位高手指点一二，不胜感激
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