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标题:【求助】提取的质粒 RNA含量高 如何去除

malong[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】提取的质粒 RNA含量高 如何去除

我提取完质粒后   电泳鉴定    发现有很多RNA    测下OD  260/280比值大于2
我想求助下   如何除去样品里的RNA
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886爱[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

加RNase A 消化去除RNA。可以先加1 ul或2ul，37度水浴1-2小时（如果RNA实在太多，仍可消化过夜），然后取一点电泳看看RNA是否已去除。
作为要求严格的实验在消化后最好再进行氯仿抽提一下去除RNase，视你后续实验而定。
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p1900[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

自己手提的是吧？最好一次提取用的菌液少点，这样消化起来也更快更干净。RNase A一般浓度达到100ug/ml就可以了。另外，RNase A容易失活，最好能确定其是否失效。
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malong[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

不需要管 过几天就没了。。。RNA太容易降解，要快就加RNase吧
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hcy517[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

最好溶解的时候用加有RNAse的水溶解就好了。
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发表于 2015-12-1 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

用试剂盒吧，方便也便宜，从没发现RNA的污染，生工的才几毛钱一个样
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hcy517[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

试剂盒中一般都会带有RNA酶，一般加到P1里面就能解决问题，楼主不会现在还用手提把？
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小熊妮妮[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

RNase是处理的有效方法，注意保证试剂活性，添加量100ug/ml。实验遇到过顽固的RNA，自行降解很缓慢。如果实在难去除，建议考虑过夜处理。
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发表于 2015-12-1 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我们把RNase配成10mg的母液，然后每毫升TE里面就加2ul的RNase，就用TE溶质粒，RNA就没有了，RNase很稳定的
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钻石[使用道具]
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发表于 2015-12-1 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

:jok:RNA 本身就容易降解，因为环境中RNase  比较多，不放心就再加点吧，或者可以试试用RNA清除剂处理一下实验环境。
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