小中大【求助】我配的10XPCR Buffer怎么了？稳定性？高效率？
最近，小弟做PCR，因模板GC含量高，用TAKARA的GC Buffer扩增效率还可以了，但感觉太贵了，2XGC buffer才1.25ml要60RMB啊，那个黑啊！无法忍受之下，决定自配PCR Buffer。找了两个配方：
1: Mgcl2, Tris-HCL(PH 8.4), KCl, betain(终浓度分别为 15mM, 100mM, 500mM, 1M);
2: Mgcl2, Tris-HCL(PH 8.4), KCl, DMSO(终浓度分别为15mM, 100mM, 500mM, 5%）
捣鼓了半天的瓶瓶罐罐，终于配好了，各配了100ml，各取1ml留用，其它-20冻存。分别标记为 Buffer1 和 Buffer2。好了，下面开始PCR了，头次试验时用了Buffer1， Buffer2，Takara GC Buffer I 做平行比对试验，即PCR体系和PCR程序完全一样，就Buffer不一样。结果如图1所示。从图上可以看出自配Buffer1/2除了扩增效率稍微比GC Buffer差点，其它都OK啊，心里窃喜啊！准备第二天大扩一通！
第二天，以相同的体系，程序和PCR仪器用Buffer 1扩了20个左右的样本（该批样品以前都用GC Buffer扩过，模板没有问题），电泳结果令我沮丧啊，见图2，扩增效率普遍低下，有的泳道有结果，有的没有结果，当时怀疑是不是模板放久了，部分模板降解了，不甘心之余，当即决定加大扩增结果不好的模板的量，降低1度退火温度，而且Buffer1，Buffer2同时上马。
第三天，电泳结果出来了，结果更是奇怪啦，第二天碰到的怪事第三天也碰到了，更奇怪的是，同样的模板，有的Buffer1出来了，Buffer2没有出来，有的则相反！晕菜哦！
从以上三天试验结果可以看出自配PCR Buffer的扩增效率越来越差，稳定性越来越低，这是什么原因造成的呢？需要提出的是，由于个人习惯原因，本人习惯把用完的Buffer -20度保存，下次使用再解冻使用，这样是否会对Buffer的稳定性造成一定的影响，但以前用Takara 的GC Buffer时也是这样做的，也没有发现明显的问题。还有就是这批模板都是人gDNA,其中有手工抽提的也有试剂盒抽提的，但结果没有什么明显不同。
个人觉得是不是PCR Buffer的PH值变化导致Buffer的稳定性和扩增效率都降低？但不至于降得这么快吧？还有就是正常PCR Buffer的PH值是多少啊，有谁知道。
看到有的PCR Buffer 配方中加 Triton X-100，终浓度0.1%，不知道有什么用，个人猜测是利用其变性剂的本质来更好的展开，稳定DNA模板？提高PCR反应效率？
总之，为什么自配的PCR Buffer的稳定性，效率会降低得这么快，还请各位战友多多提提意见，想法什么的啊，欢迎，欢迎，热烈欢迎。
