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标题:【求助】microRNA逆转

wawa[使用道具]
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发表于 2015-12-2 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】microRNA逆转

你好，我们实验室想做关于microRNA方面的一些东西，但资金有限，想求助关于试剂方面的事。我们订购的锐博的microRNA茎环引物，在做RT的时候又疑问，锐博已经提供了RT逆转茎环引物，那我该选择怎么样的试剂盒呢？市售的试剂盒一般是加尾的。因为资金有限，我们实验室一直用的Takara的RNA逆转试剂盒，不知takara里有没有合适的试剂盒？有文献报道用的RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit Fermentas:K1622，我该用逆转RNA茎环引物替代其中的引物？条件怎么摸索？望不吝赐教。
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-12-2 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关注中，我也要做miRNA方面的实验，经费也有限。
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misswu61[使用道具]
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发表于 2015-12-2 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果资金有限就应该选择加尾法，而不是茎环法，引物后者要反复提RNA和逆转录，比较浪费试剂
我们实验室的引物都是我自己设计的，其实茎环法很简单，只要确定了茎环序列，最后的6-7个氨基酸与miRNA的最后6-7个氨基酸互补即可，为什么要购买公司的茎环逆转录引物呢？
逆转录时任何逆转录试剂都可以完成逆转录，如果经费紧张当然选择便宜的了，然后将体系尽量压缩点以节省试剂。
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-12-2 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 misswu61 于 2015-12-2 15:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果资金有限就应该选择加尾法，而不是茎环法，引物后者要反复提RNA和逆转录，比较浪费试剂
我们实验室的引物都是我自己设计的，其实茎环法很简单，只要确定了茎环序列，最后的6-7个氨基酸与miRNA的最后6-7个氨基酸互补即可，为什 ...

仁兄能否告知颈环序列呢？
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发表于 2015-12-2 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室一直在做miRNA，你可以订购逆转录引物，至于逆转录，我们一般不买试剂盒，就买Promega的MLV逆转录酶
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发表于 2015-12-2 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加尾酶也不很便宜，还很费，相比之下合成茎环引物序列也不是很难接收
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发表于 2015-12-2 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

宝生物有一款用于miRNA定量检测的试剂盒，是加尾法的反转录，可以看看下面网页：
cuturl('http://www.takara.com.cn/?action=Page&Plat=pdetail&newsid=807&subclass=1')
这个Kit提供反转录引物和PCR扩增的下游引物，只要设计上游引物就行了。
如果坚持使用颈环引物反转录的话，那么有两篇文献分别用的PrimeScript反转录酶和PrimeScript RT reagent Kit
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发表于 2015-12-2 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果资金有限就应该选择加尾法，而不是茎环法，引物后者要反复提RNA和逆转录，比较浪费试剂
我们实验室的引物都是我自己设计的，其实茎环法很简单，只要确定了茎环序列，最后的6-7个氨基酸与miRNA的最后6-7个氨基酸互补即可，为什么要购买公司的茎环逆转录引物呢？
逆转录时任何逆转录试剂都可以完成逆转录，如果经费紧张当然选择便宜的了，然后将体系尽量压缩点以节省试剂。
......

===============================================================================================================

请问前辈，我准备用takara的逆转录试剂盒做miRNA与mRNA的定量PCR，请问，逆转录试剂盒是miRNA与mRNA通用（引物除外）的，还是各自有各自的不同试剂盒，我问买试剂的那个人，那个人说是micro的试剂盒，具体他不清楚，因为我想先做mRNA的，我怕买回来之后的逆转录试剂盒是只适用于miRNA的，谢谢！
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发表于 2015-12-2 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是用的锐博设计的茎环法miRAN引物，遇到和楼主一样的困惑，正不知用哪家的逆转录及荧光定量PCR盒子，请问楼主用的哪家的？谢谢
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cocacola[使用道具]
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 小中大
我公司提供microRNA检测试剂盒，并已建立验证试剂盒库存，发货周期短，价格公道，并有多种配套核酸提取纯化试剂盒和逆转录试剂盒，更多microRNA和mRNA库存详见网址：cuturl('www.novland.com.cn')
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