【求助】两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊？

PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊？

19 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊？

fox_79[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76205
精华 0
积分 546
帖子 691
信誉分 100
可用分 4423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2015-12-4 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

刚买回来的两个OD的干粉状引物要怎么稀释备用啊？一般浓度稀释到多呢？哪位战友能给个具体的实际操作步骤或细节啊？在线急盼啊

xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-12-4 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先离心！然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液（约100μM），保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。
引物浓度不宜偏高，浓度过高有两个弊端：一是容易形成引物二聚体（primer-dimer），二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时，容易产生非特异性产物。一般说来，用低浓度引物不仅经济，而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/μl较好。

fox_79[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76205
精华 0
积分 546
帖子 691
信誉分 100
可用分 4423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2015-12-4 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先，强烈感谢主任的热情帮助，您总是最快的回复，最好的答案。
另外，由于我是新手，想再请教主任几个比较菜的问题，还望您指导：
1 引物的分子量如何计算？比如：AAGCTTTTACCGC的分子量是多少？
2 OD值，1个OD值是不是等于40UG。
3 质量数，质量数的含义是什么，怎么计算？
4摩尔数（μmol）和终浓度(pM)和稀释水量（μl）
是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数？具体的公式是什么呢？
向您再次致谢！谢谢！

xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-12-4 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

合成引物的单子上应该有算法：
1OD=33ug
1个碱基的分子量=324.5
（以上为近似值，通常都这样用）
1条引物的分子量=碱基数*324.5
质量数=OD*33ug
摩尔数=质量数/分子量

hyuu[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79232
精华 1
积分 626
帖子 847
信誉分 102
可用分 5149
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态离线

发表于 2015-12-4 11:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我补充问一点，先离心的原因是什么？
直接把算好的ddH2O加进去颠倒混匀后不是效果一样么？
另外，我们实验室的好象都习惯在静置4度过夜，这样引物分子能更好的扩散，均匀分布于液体中，个人认为这样也是很有道理的

xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态离线

发表于 2015-12-4 11:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

因为引物合成后是干粉状的，在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上，直接打开有些粉末可能会飘出去，引物的量就减少了。先离心使粉末都到管底，可以避免这种现象的发生。4度过夜也可以，不过一般室温10分钟，吹打混匀即可。

moonlight[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76228
精华 0
积分 194
帖子 187
信誉分 100
可用分 1611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2015-12-4 11:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于－20度保存。

vvmmoy[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79224
精华 0
积分 825
帖子 1270
信誉分 100
可用分 7255
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态离线

发表于 2015-12-4 11:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

订引物回来的说明书背面一般都有引物稀释计算的说明的.

vera+[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2015-12-4 11:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于－20度保存。
计算结果单位不对呀。是估算值吗？

xevin[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2015-12-4 11:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 vera+ 于 2015-12-4 11:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
先离心,以防打开后粉末飘散出去。然后根据以下公式可计算出所加双蒸水的量
33nmol/OD×管上所标OD值×100
是为10pmol/ul浓度的引物溶液,还可以由此推算其它浓度所需的双蒸水量。
可于－20度保存。
计算结果单位不对呀 ...

给你提供一下我们的计算方法，引物浓度50uM，需加ddH2O的计算公式：
OD值×33ug×1000000/（50uM×引物分子量），算出的ddH2O体积单位为ul

19 1/2 1 2 ››