生物质谱

第一天用抗原抗体亲和层析，纯化得到的浓度虽然不高，但是western-blot能检测到。接下来反复过柱子，大概一个星期，将得到的蛋白溶液透析浓缩，可是western竟然检测不到了。很奇怪，难道是蛋白浓度低且在4度放了一个星期，蛋白降解了。浓缩条件是聚乙二醇20000，透析是4度PBS,个人认为也不会有问题。除了蛋白裂解液中的蛋白酶抑制剂，纯化的一个星期中都没有补加，不知大家如何补加了，是否对我的降解也有影响，疑惑，求指点。

你不能制备多一些蛋白质？

是这样，我是用抗原抗体亲和层析，对抗体要求量很大，抗体购买的明显较少，所以我只能积少成多。

能不能用别的方法来纯化

用低于蛋白分子量的超滤凝缩管浓缩，蛋白纯度大于90%，可以把蛋白液（100微升左右就可以）交给一些专门得公司去做，省时省力，而且比自己处理的要好。