【讨论帖】成熟脂肪细胞、脂肪干细胞交流 - 经验共享

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标题:【讨论帖】成熟脂肪细胞、脂肪干细胞交流

wzqzy[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 purrr 于 2015-12-11 11:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

据我观察，也不是所有的脂肪干细胞都呈梭形，有些就是多角形。呈漩涡状分布的话，一般是细胞密的时候呈现，此时细胞状态应该也是很好的。

那请问楼主，怎么样调整可以让梭形多些，密集些，状态好些呢
我使用含10%FBS的低糖DMEM作为培养基的，加了P/S，传代的话就是0.25%的胰酶了，可就是多角形细胞特别多，状态不好

purrr[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这样培养貌似没什么问题，不知道你细胞具体是怎么提取的？

taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 purrr 于 2015-12-11 11:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这样培养貌似没什么问题，不知道你细胞具体是怎么提取的？

是取人腹部皮下的脂肪组织，剔除血管和纤维组织（肉眼下），然后漂洗剪碎，用0.125%的终浓度I型胶原酶水浴消化40分钟，其中每10分钟会震动10秒，消化的效果还可以，细胞比较多。然后就全培终止消化，1000g/min离心5分钟，我没有过滤，因为之前过滤感觉细胞很少，然后就重悬接种了。
是因为没有过滤么？

taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

但是脂肪干细胞本身就是混杂的细胞，过滤应该对细胞种类影响不大吧？

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，我也在养脂肪干细胞，是大鼠脂肪提取的。
我们用FACs鉴定了stro－1，CD45,CD90,CD105,CD34。其中stro－1没有检测到，CD105也不理想，请问你做细胞表面因子鉴定用的什么方法？检验了哪些因子？
有在支架上（比如BIO－GIDE）上养脂肪干细胞的吗？
谢谢！

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发表于 2015-12-11 11:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 taoshengyijiu 于 2015-12-11 11:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

但是脂肪干细胞本身就是混杂的细胞，过滤应该对细胞种类影响不大吧？

最好还是过滤下，血细胞等杂细胞太多的话对ASCS也不利，我们的经验是用100目的筛网，过滤后如果离心得到的ASCS感觉还是混有太多血细胞，建议用PBS洗下

purrr[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Hey,你好，我也在养脂肪干细胞，是大鼠脂肪提取的。
我们用FACs鉴定了stro－1，CD45,CD90,CD105,CD34。其中stro－1没有检测到，CD105也不理想，请问你做细胞表面因子鉴定用的什么方法？检验了哪些因子？
有在支架上（比如BIO－GIDE）上养脂肪干细胞的吗？
谢谢！
......

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您好，我们用的是流式细胞分析鉴定。实验室检验过CD49，其它的不太清楚。没在支架上养过，不过我们老板在国外留学时做过

duchy[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Hey,你好，我也在养脂肪干细胞，是大鼠脂肪提取的。
我们用FACs鉴定了stro－1，CD45,CD90,CD105,CD34。其中stro－1没有检测到，CD105也不理想，请问你做细胞表面因子鉴定用的什么方法？检验了哪些因子？
有在支架上（比如BIO－GIDE）上养脂肪干细胞的吗？
谢谢！
......

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你养的细胞中游多少是脂肪干细胞，CD45的阳性率是多少，九十几啊。另外你对细胞进行诱导分化方面的实验吗

summerxx[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问,不需要传代,怎样提取更纯的脂肪干细胞?

purrr[使用道具]
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发表于 2015-12-11 11:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 summerxx 于 2015-12-11 11:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问,不需要传代,怎样提取更纯的脂肪干细胞?

消化离心后可用筛网过滤，PBS洗2-3遍~

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