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标题:【求助】关于扫描电镜观察病毒的方法

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发表于 2015-12-15 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于扫描电镜观察病毒的方法

关于扫描电镜观察病毒的方法

手里有50微升慢病毒原液10的8次方量，我想看下扫描电镜下的形态，问问大家如何做，谢谢。

我的想法是将病毒原液滴到盖玻片上1微升的量，干燥30分钟后，用2.5%戊二醛固定30分钟，酒精梯度脱水，干燥，喷金处理，电镜观察，不知可以吗？
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哈密瓜[使用道具]
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发表于 2015-12-15 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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以前用透射看过，可能是镜子太老了，只能看到很小的点~~30nm左右的细小病毒~~~

而扫描电镜的分辨率更低，估计即便能看到，效果可能也不会很理想。

你的样品在脱水以后，需要粘贴在一种铜胶带上（类似于双面胶，不过中间是铜的），然后再粘在专用的载物台上，再进行喷金等操作
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发表于 2015-12-15 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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病毒一般是用透射电镜负染法观察，磷钨酸染色。

为何用扫描电镜呢？喷的金颗粒会把细节都盖住的，还能看到病毒颗粒吗？
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rrra6[使用道具]
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发表于 2015-12-15 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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记错了......做细菌好像用锇酸~~
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灵魂[使用道具]
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发表于 2015-12-15 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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锇酸的作用主要是固定剂，同时也可以起到一定的染色作用，无论是透射还是扫描电镜，一般制样都会用到锇酸。如果是病毒的负染色技术，就不会用到锇酸。
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发表于 2015-12-15 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我们的扫描电镜是s4800场放射电镜，精度可以到1nm的，因为病毒的量较少，不知道固定脱水后还能剩下多少，可否介绍下经验减少损耗，因为固定脱水每一步都要离心，离心就有损耗。
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yayayu[使用道具]
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发表于 2015-12-15 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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病毒离心是要超离吗？这样岂不是很麻烦？以前做过红细胞的扫描电镜，就是滴到盖玻片上，固定以后会有些吸附在玻片上，然后脱水，干燥，喷金，上机。
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