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标题:【分享】分享个我自己制作的萤光定量PCR计算器

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发表于 2015-12-17 15:08 资料  个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【分享】分享个我自己制作的萤光定量PCR计算器

受别的帖子启发，分享个我自己制作的萤光定量PCR计算器，用软件导出的Excel表格，复制其中的Ct值到本计算器中，直接计算出2-△△T。

使用说明：
1，导出Ct值
2，分别复制各个样本的目的Ct，内参Ct与本计算器中，黑色方框里（分别有2副孔/3副孔的计算页面）
3，最下面2-△△T，直接得出结果，设第一组为1
4，自己再把数据倒入GraphPad Prism 5，做图、分析

Ps：意在分享，有问题欢迎批评提出，共同进步探讨。
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p1900[使用道具]
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发表于 2015-12-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

楼主，为什么是目的基因CT值各自减去内参基因CT平均值，而不是目的CT平均值减去
??
内参基因CT，最后得到一个△△T呢
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xiaoxiaojinglin[使用道具]
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发表于 2015-12-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 添加 xiaoxiaojinglin 为MSN好友 通过MSN和 xiaoxiaojinglin 交谈

 小中大

【回复】

我的理解是：
因为目的基因的差异比较重要，包含了更多的统计信息。
而内参基因表达量其实比较恒定的，变化差异较小。
这也是有些时候内参只跑2孔甚至1孔的原因。
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xiaoxiaojinglin[使用道具]
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发表于 2015-12-17 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 添加 xiaoxiaojinglin 为MSN好友 通过MSN和 xiaoxiaojinglin 交谈

 小中大

【回复】

有一个小疑问，每次试验的副孔是用来减少操作带来的差异吧？目的基因的差异应该是不同批次的PCR结果吧？这样计算单次试验结果的时候不应该是目的基因平均值-内参平均值吗？
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美人鱼[使用道具]
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发表于 2015-12-17 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

你的意思应该是重复试验，然后在最后统计是吧？
这个应该跟试验设计有关，应该也是可以的
我们这边说是尽量让样本在同一个批次里做，这样他们相当于在同一个条件下进行的
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