小中大请教各位高手,我用 Invitrogen 的Trizol 和 Roche的 Tripure 提胎盘组织总RNA,共提了11次, 虽然产量和A260/A280都可以, 但RNA总有降解(18S的亮度超过28S,且18S以下有大片条带). 使用Promega的M-MLV用下游引物和Oligo dT逆转录的cDNA的分子量都在500bp以下(我的目的条带为2000bp左右), 用高保真Taq酶做 PCR的结果为500bp 以下的3条非特异性条带,改变模板浓度后仍未出现目的条带.
组织切下后即放入液氮,至今有2个月. 各种玻璃器皿和枪头都用DEPC浸泡过夜后高压灭菌. RNA提取后即逆转录,次日PCR.
真搞不懂问题在哪里.
渴望大家帮助!