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标题:长PCR疑难问题

猫屎一号[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议重新设计引物，增加Tm值，以缩小PCR产物与引物Tm值的差距，增加扩增效率
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猫屎一号[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议重新设计引物，增加Tm值，以缩小PCR产物与引物Tm值的差距，增加扩增效率
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caihong[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
4kb
叫长PCR？？
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caihong[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
4kb
叫长PCR？？
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
4kb
叫长PCR？？

===============================

那多少算？偶还真是不太清楚，请指点啊
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红豆冰[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
TAKARA LATAQ是扩增长片段的，可以良好的扩增小于20kb的片段，可能扩增小于30kb的片段，这应该叫长PCR吧
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阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. 4kb算不上是长片段。
2. 72°10分钟太长了，会有smear出现，也就是你说的一团荧光，酶也容易失活。4分钟足够。
3. 把弱的条带切下，连进T-载体，这样模板不需要太多，就能成功，再用质粒扩增片段，比二轮PCR好做一些。
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