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标题:【求助】高效液相相关的问题

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2015-12-22 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】高效液相相关的问题

我是一名新手，最近一直在做高效液相，完全自己在摸索，在使用的过程中有些地方有疑问，想请各位大侠们帮帮忙给点意见哈！问题如下：
1.我用的0.2molL的磷酸二氢钾缓冲液，浓度是不是很大能？听说浓度大了对柱子损伤比较大，而且使用的过程中在有些阀的部位都会有结晶。
2.用了缓冲液以后是要用水冲洗的吧？我用的是C18的柱子，长时间用水冲洗会不会对柱子有很大伤害啊？用什么洗比较好呢？
3.有个很奇怪的现象，明明缓冲液在ph＝3.75的时候峰有分但不很开，为了峰分的更好一些，我将缓冲液的ph调节了，用了ph＝5的缓冲液，分不开峰，然后再用3.75的缓冲液峰也分不开了，很不明白！有哪位色友有出现过和我这种情况相似的吗？
各位，指教指教啊！先谢过啦！
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04906[使用道具]
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发表于 2015-12-22 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0.2mol/L的磷酸二氢钾缓冲液的浓度不高的，在使用完以后用10%的甲醇水冲洗色谱柱1个小时以上，在用甲醇保存色谱柱。在峰分不开不一定是PH值的问题，调节流动相中有机相的比列，减少流速、降低柱温等方法都提高分离度。
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发表于 2015-12-22 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、0.2mol/L的磷酸二氢钾缓冲液的浓度有点大，最好在0.01~0.05mol/L

2、使用完以后用10%的甲醇水冲洗色谱柱1个小时以上

3、有可能是柱子平衡问题
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发表于 2015-12-22 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
检测什么项目用的流动相?
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ztonyc[使用道具]
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 小中大
1.缓冲盐的浓度太高了，一般为0.01~0.02mol/L，你自己也说了，有些阀的地方有结晶，这是不可以的对仪器损伤太大，结晶都这么明显了，肯定是浓度太大
2.C18的柱子在冲洗的过程中，有机系的含量最好不要低于5%不然会对柱子造成损伤，可以用5%的乙腈水溶液冲洗
3.低的pH值有利于你的样品的分离，但样品的分离不仅仅是pH值的问题，还跟有机系的浓度、流速、柱温有关

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nn255[使用道具]
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发表于 2015-12-22 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
agilent 有个泵清洗系统，每次使用时，尤其是在使用缓冲盐流动相时一定要打开，清洗液为5%的异丙醇水溶液，以防结晶析出，损坏宝石杆
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summerxx[使用道具]
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发表于 2015-12-22 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意楼上　在用缓冲盐作流动相的时候　要打开ＳＥＡＬＷＡＳＨ　冲洗泵头　２－３滴／ＭＩＮ　就可以了　我用的异丙醇是１０％的
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2015-12-22 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、0.2mol/L的磷酸二氢钾缓冲液的浓度有点大，最好在0.01~0.05mol/L

2、使用完以后用10%的甲醇水冲洗色谱柱1个小时以上

3、有可能是柱子平衡问题


1.2如上，3提点个人看法，重新配制试试，不过酸度对分离度影响不是很大。
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bhka[使用道具]
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发表于 2015-12-22 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

3.一开始可以分的更换pH后换回原先的就在分不开，最大的可能性是你换回原先的pH柱子未得到充分的平衡
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JK.jon[使用道具]
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 小中大
1.我用的0.2molL的磷酸二氢钾缓冲液，浓度是不是很大能？听说浓度大了对柱子损伤比较大，而且使用的过程中在有些阀的部位都会有结晶。---这个比较高 一般都是0.2就够了
2.用了缓冲液以后是要用水冲洗的吧？我用的是C18的柱子，长时间用水冲洗会不会对柱子有很大伤害啊？用什么洗比较好呢？--建议10%甲醇水冲洗40min，再纯甲醇40min足够
3.有个很奇怪的现象，明明缓冲液在ph＝3.75的时候峰有分但不很开，为了峰分的更好一些，我将缓冲液的ph调节了，用了ph＝5的缓冲液，分不开峰，然后再用3.75的缓冲液峰也分不开了，很不明白！有哪位色友有出现过和我这种情况相似的吗？--估计是柱子没有充分平衡吧 你连续走几针看看保留时间差别呢？？
各位，指教指教啊！先谢过啦
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