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标题:【求助】药典上的方法怎么做不出来

小困[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】药典上的方法怎么做不出来

2010版药典氨甲环酸的液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.23%十二烷基硫酸钠溶液（取磷酸二氢钠18.3g，加水800ml溶解，加三乙胺8.3ml混匀后，再加十二烷基硫酸钠2.3g，振摇使溶解，用磷酸调pH值至2.5，加水至1000ml摇匀）-甲醇（60：40）为流动相；检测波长为220nm。取氨甲环酸与氨甲苯酸适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含氨甲环酸0.2mg与氨甲苯酸2µg的溶液，取20µl注入液相色谱仪，调节流速使氨甲环酸保留时间约为13分钟，氨甲环酸与氨甲苯酸的分离度应大于5.0。

我做了快两个星期了一直做不出来，主峰保留时间总是往后拖，而且基线不平，总是上扬，且主峰前面好像有好多东西似的高低不平，后来我换了仪器，柱子，所有试剂都换了还是跟原来一样，怎么回事呢？？？
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
帖上图谱看看~

保留时间不稳定，基线不平跟流动相的关系很大。
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耗子===[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能是系统没有平衡好
可以低流速过夜平衡
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greenbee[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做了快两个星期了一直做不出来，主峰保留时间总是往后拖，而且基线不平，总是上扬，且主峰前面好像有好多东西似的高低不平，后来我换了仪器，柱子，所有试剂都换了还是跟原来一样，怎么回事呢？？？

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延长平衡时间，保留时间有平稳的趋势么？
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xevin[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种情况就应该多平衡平衡。
高低不平有规律吗？
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发表于 2015-12-24 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
离子对的一定要平衡很长时间。
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小困[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家的解答，今天又换了十二烷基硫酸钠还是没做出来，保留时间还是往后拖，从早上的4.6分钟到下午的16分钟，且溶剂峰也总在变样
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发表于 2015-12-24 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你用的哪个牌子的C18柱？最好选择疏水性强的，碳载量高的，不要选太贵的，这个实验条件很废色谱柱，
还是要多平衡，流动相过夜冲柱子，
基线平稳了，再进样！
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小困[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的的钻石C18，4.6*250mm,新柱子，但是发现一个问题，第一次用一种十二烷基硫酸钠，三天后发现流动相析出了，换了一种十二烷基硫酸钠，半天就析出了，而且混的很厉害，有知怎回事呀。。。有谁做过这个品种呀，给支一招吧，谢谢呀！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2015-12-24 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家的解答，今天又换了十二烷基硫酸钠还是没做出来，保留时间还是往后拖，从早上的4.6分钟到下午的16分钟，且溶剂峰也总在变样

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一般来说，药典的方法，尤其是含量测定的方法，都是由一个部门起草，另一个地方复核，所以首先我们不应该考虑是方法的问题。

然后来分析一下你的测试过程：主峰的保留时间在变，溶剂峰也在变样子——说明你的系统不稳定，那么下一步就应该找找你系统部稳定的原因——色谱柱问题？液相色谱仪问题？流动相系统问题？
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