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标题:【求助】用UPLC的筒子们，你们一般都进行什么前处理呢？

INK[使用道具]
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发表于 2015-12-24 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】用UPLC的筒子们，你们一般都进行什么前处理呢？


总算见到了传说中的UPLC，带着无比激动的心情踌躇满志的开始了自己的实验。结果只用了一天就悲剧了，一根新的100mm，2.1mm,1.7um的BEH英勇就义，之前0.4ml/min的乙腈压力在2000多PSI，现在同样条件下压力11000，显然是堵了。回顾一下，新配的流动相，新配的对照品，新配的中药制剂平且过了0.22um的膜，好像都没问题，问题到底出在哪呢？
柱子在提高温度后用小流速冲着，但愿能活过来...
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发表于 2015-12-24 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有用过UPLC，但听过很多用过的说太容易堵
1。其实很明显100mm，2.1mm,1.7um，填料是1.7um，过了0.22um的膜，显然是不能满足要求的
流动相、样品只有过1um的膜才能满足要求，而且质量要好，有些标称的是多少孔径的膜，并不能说明所有的质量都满足要求
2。如果有配套的话，必须加保护柱，（当然粒径也是1.7um以下的）
按照5um填料的色谱柱习惯来操作2um以下的，肯定要容易堵
提高温度后用小流速冲，应该有一些效果，毕竟管柱的热膨胀是大于填料的，有好的效果估计很难，除非堵住的杂质是溶于流动相
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发表于 2015-12-24 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩，顶楼上，我们是国内第一家生产出UPLC分析柱子的厂家
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发表于 2015-12-24 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个最好加保护柱，另外可以反冲一下
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发表于 2015-12-24 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩？兄弟是不是看错了？1um的膜？ 其实 理论上来讲 1.7u的用0.2的膜过滤 是可以达到要求的 5u的一般用0.4的过就可以 今天冲一晚看看 实在不行只能反冲了
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发表于 2015-12-24 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议楼主进样前将样品离心，我们现在也用UPLC，分析的生物样品，一般蛋白沉淀后13000rpm离心15分钟，取上清，复溶后再4000rpm离心10分钟进样，我们一般用96空板的进样，所以离心板子只能4000rpm，用了有半年了吧，没有发现有堵柱子的现象，感觉比过膜的效果要好，希望对你有帮助。
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发表于 2015-12-24 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主你如果是生物样品一定小心处理啊，离心过滤都要做得很好，我们做普通小分子样品，用0.2um滤膜过滤就好了，流动相都要用滤膜过滤，而且流动相A最好每天更换，再加个保护柱，基本能万无一失。
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发表于 2015-12-24 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看看是不是柱前滤片堵了.悲剧啊,我以前都0.1ml单独做含量测定(紫外灯)都很好的,后来连续做15个质谱(0.4ml流速,样品都离心后用0.22um过滤的,进样5ul.UPLC连质谱的),第二天柱压猛增2000,工程师(第一天也来的)检查后发现柱前过滤片堵了,换好后再做(压力恢复第一天的),第三天再做,发现柱子堵了(才用来了半年的柱子啊).回天无力了.
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发表于 2015-12-24 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

UPLC就是怕堵，前处理一定小心，柱子一定多多的冲洗
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zhenxin[使用道具]
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 小中大
有一利就有一弊
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