小中大我也是用U6作为内参，是鸡上的U6，参考的是别人文章中报道的：
Chicken small nuclear RNA U6 (GCAGGGGCCAUGCUAAUCUUCUCUGUAUCG)
was used for normalization. The expression levels of novel miRNAs were measured in terms of threshold cycle value (CT) and normalized to U6 using 2-ΔΔCT [72].
我们根据这个序列设计引物，因为这个序列本身比较长，所以我们只取了一部分大概20nt左右，和其他miRNA一样也是进行Stem-loop RT引物设计，然后反转录，最后设计上下游引物进行定量。
但是定量后发现CT值上不去，都在24-28之间徘徊，有的达到了30，我们想了2个方案解决这个问题：
1. 买公司设计好的U6，但是U6多是人和小鼠上的，不知道拿到鸡上是否好用，而且ABI的U6是探针法设计的，我们用的是sybrgreen法定量。所以这个方法似乎不可行
2. 换一下内参，我看到有人直接用GAPDH等作为内参基因，不知楼主对这方面了解多少？我们实验室用过28s, 是用来做普通的基因表达定量的。可以用于miRNA定量吗？如果拿来作为miRNA的内参，是直接可以用（像普通的基因表达实验一样，直接用T18把RNA反转成cDNA）还是要走其他miRNA定量的程序呢，即从序列中截取一段20nt左右的序列进行stem-loopRT引物设计和后面的定量
希望LZ指教，谢谢！
