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标题:[分享]miRNA用荧光定量PCR检测的流程以及汇总

椰子叶子[使用道具]
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楼主啊楼主 我请教你 我什么我的PCR结果曲线高度不够,而且电泳没跑出来 是怎么回事啊,大哥 请指教

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我替楼主回答一下吧。

你说的是荧光值不高是吧,那Ct值怎么样,要是Ct值还可以的话结果还算理想,然后熔解曲线特异性分析,做QPCR一般不用跑电泳的。
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椰子叶子[使用道具]
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PDF格式错误太多了。CAJ格式的附上。

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我查了下文献,有蛮多文章用的invitrogen的TRIZOL LS 试剂提血清/血浆miRNA,楼主可以关注一下。
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椰子叶子[使用道具]
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lz你好

我是新手,想做miRNA的QRT-PCR,您上面说如果是细胞的话,直接用Trizol提就好,请问反转录试剂盒用哪个公司比较好?文献上大多是用Taqman microRNA array kit,由于经费不多,我想用染料法,想求些好的建议。对于茎环引物一般用哪个公司设计?如果要验证七八个的话,一共下来要多少钱?问题有些傻,请别见笑>

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有几家公司据我了解提供验证好的引物,像ABI、qiagen、genecopoeia等,你可以上网查下或者打电话去客服问问。个人觉得现在不管是基因还是miRNA的表达量检测都有不少公司提供现成的引物,可以节省大量的精力去设计引物和摸索条件,非常方便。
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喜乐lele[使用道具]
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我是新手,想请教一下各位加尾法大家谁家的试剂盒比较好?
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冷太阳[使用道具]
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我用了TAKARA加尾法逆转录试剂盒,结果扩增出来好多都有两三条带?有些可能是前体,那么前体的出现影响分析吗?另外,我测序了一个microRNA,结果发现是一个混合物,这个microrna后面还跟了9个碱基?加尾法还能用吗?
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飞天小鹿[使用道具]
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你们好请问知道了某种MiRNA的逆转录引物、上下游引物,可以手工计算它的PCR产物长度吗?是不是就是上下游引物之间的片段(含引物),好心人帮忙解答啊
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云端ing[使用道具]
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有什么问题欢迎大家来这里讨论。

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你好,请教您一个问题,您做过miRNA前体的qRT-PCR检测吗?我现在想做pri-、pre-、mature miRNA三个水平的qRT-PCR检测,请问有什么好的建议吗?用什么kit 好呢?谢谢。
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