PCR仪

正向引物：序列5，-ACACTCCAGCTGGGGTCCAGTTTTCCCAGGA -3，
URP：统一反向引物，也是一段固定的序列，TGGTGTCGTGGAGTCG
U6引物F-CTCGCTTCGGCAGCACA ，R-AACGCTTCACGAATTTGCGT

==============================================================================================================

你好，由于您的图片看不到，只能就您的引物来分析下：就您的正向引物来讲，这个引物的TM值高达76度，而反向引物TM值只有51度。从这里分析：这对引物由于TM相差实在太多，（Primer Express3的参数）我以前做的是在正向引物的5‘端加几个类似保护碱基就够了，没有像您那样加的那么多，而且在引物设计时，最好能引物设计和本身序列两方面都考虑下，找个折中的引物序列。而且检测基因的引物跟您的U6引物的TM值最好相近（毕竟您要他们在一个PCR仪里面同时工作）。
PCR产物没有的话应该没扩增。如果您的实验有CT值的话，请问做没做NTC？NTC有没有CT值？
希望对你有用。

你说的是不是阈值和基线？

===================

不是，是荧光积累高度

你好，由于您的图片看不到，只能就您的引物来分析下：就您的正向引物来讲，这个引物的TM值高达76度，而反向引物TM值只有51度。从这里分析：这对引物由于TM相差实在太多，（Primer Express3的参数）我以前做的是在正向引物的5‘端加几个类似保护碱基就够了，没有像您那样加的那么多，而且在引物设计时，最好能引物设计和本身序列两方面都考虑下，找个折中的引物序列。而且检测基因的引物跟您的U6引物的TM值最好相近（毕竟您要他们在一个PCR仪里面同时工作）。
PCR产物没有的话应该没扩增。如果您的实验有CT值的话，请问做没做NTC？NTC有没有CT值？
希望对你有用。

==========================================================

我问一下 你那个PCR的荧光积累高度是多少？我只有0.5-1 是不是太低了

荧光积累高度？？不是很懂。这样说吧，在扩增曲线的纵坐标（应该是这个吧）有3种情况，每个情况的纵坐标的数值是不一样的。如果纵坐标是代表“Fluorcscence”所谓的荧光增长值的话，几k到10k又会有的，如果纵坐标是“DATE Rn”的话，log值0.1到1啊什么的小数值也很正常，就是线性数值0.1到100也可能的。

============================================================================================

所以不必在意那个数值，如果你非要看荧光增长值（也许就是你说的荧光积累高度吧），可以调到“component”界面来看