PCR仪

EcoRI 和BamHI是能够同时进行酶切的，我做过，效果很好。用的是NEB的美和Buffer。 双酶切时应该用EcoRI的 buffer.
我现在遇到的一个问题是： ＰＣＲ产物连接到ｐＧＥＭ－Ｔ载体后测序发现，我当初引物设计时加上的一个ＥｃｏｒＩ的酶切位点不见了，末端少了　两个碱基，ＧＡ。　我用的酶是生工的Ｔａｑ　ｐｌｕｓ，　最初我坚信是引物的问题，可后来我看到Ｔａｑ酶有５‘－３’外切酶活性，不知是不是在ＰＣＲ　是引物的‘５’端被切掉了两个碱基，导致了酶切位点的消失。　恳请大虾指点迷津。　

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我想你说的情况比较少见，一般正常的PCR不会出现，另一个关键市，TAQ酶在最后加个T，如果真是你说的，能连到T-VECTOR上，说明T还在，所以Ｔａｑ酶有５‘－３’外切酶活性的可能性不大。你可以考虑以下原因；（1）引物末端不配对碱基是不是太长，两个保护碱基加6个碱基，引物起码要在 20以上。（2）序列平读是否正确，仔细看一下测序图，机读有时会落掉。至少，你的怀疑理论上是存在的，但是实际中很少，否则，公司怎么敢卖这样的酶。