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标题:【求助】PCR产物的电泳结果目的条带很暗，一点也不亮...

蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-12-30 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也就一个月吧，应该不会吧
是不是模板少了！！
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sunbent[使用道具]
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发表于 2015-12-30 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用那个公司反转录的cDNA，我觉得你的cDNA加的有点少。通常用上海生工MMLV反转录的要加2ul左右，用promega的AMV或MMLV的都加2－3ul，当然如果你要是用invitrogen的superscript，可以少加点。我通常反转录时取1ugRNA的量去做反转录，之后25ulPCR体系模板量都是按照上面所说的加的。说句题外话，invitrogen的就是好，我通常25ul体系，模板就加0.2-0.5ul都可以。
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蒲公英[使用道具]
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发表于 2015-12-30 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我两个月以前的PCR产物，现在跑电容什么都没有，什么原因？讲解了？？
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-12-30 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做一下酶梯度，看是不是酶的用量太少了
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ujne[使用道具]
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发表于 2015-12-30 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的PCR体系是：
2×PCR MASTER MIX 25μl
上流引物 (10 pmol/μl) 1.25μl
下流引物(10 pmol/μl) 1.25μl
cDNA 2.5ul
灭菌蒸馏水to50μl
94℃ 4min
94℃ 30s
55℃ 40s
72℃ 90s
72℃ 7min
4℃ for ever
35个循
此条件下做胶回收 第一天有目的条带但是很暗，第二天未见目的条带 求解 这是什么原因
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