小中大很多战友都是“过来人”了,在菜鸟时代也曾有过现在看起来非常低级的失误,也曾有很多疑惑希望有经验的老同志给以指导,将心比心吧,人家虚心问,老同志也稍微注意一下言辞虚心作答,要不然人家的虚心就变成心虚了,兴许人家一直在搞药学研究,偶尔需要做点基因表达的东西,基础自然会薄弱些。
以上纯属灌水,见谅。
以下说说楼主的问题,我也尽量说得简明易懂些,当然表述上可能就不是那么严密了。
楼主要先明白基因,mRNA,cDNA是啥关系。
基因转录得到了mRNA,mRNA逆转录得到了cDNA
你的目的基因在基因组中的拷贝数(很多基因在基因组中只有单独的一条,但也有多条相同基因共同存在于基因组的情况,这个1条或n条的数就是拷贝数了)是一定的,你加药不加药,这个拷贝数都不会变了,所以如果你直接提取基因组DNA,那么无论怎么做PCR,也不会有差异了。
但是cDNA与基因组DNA不同,我们提取mRNA,然后用逆转录酶把mRNA变成cDNA,这样cDNA和mRNA之间就存在着等比的关系,我们用实时定量PCR或者半定量PCR检测cDNA的多少,也就相当于检测mRNA的多少,这样才能比较出你要研究的目的基因的mRNA的表达水平。
希望这些对楼主能有帮助,的确如有些战友所言,如果楼主以后要经常从事分子生物学研究的话,最好还是找机会听些课,看点书籍,多和老同志聊聊,肯定是有裨益的,祝你顺利。