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标题:【求助】请问引物2聚体大约是多少BP？

xue258[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请问引物2聚体大约是多少BP？


我的目的片段是98bp.每次看PCR产物电泳结果都分不清到底是我的目的片段还是引物2聚体.请问引物2聚体大约是多少BP?有什么方法可以减少引物2聚体?
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12xunmei[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同问这个问题，
我的目的也这么大，
听说用热启动可以避免一下。但很多时候都很难确定的。
欢迎高手进入
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misswu61[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的2位朋友，你们这么小的片段为什么不交给公司合成呢？多不了多少钱的。而且可以合成4个OD，绝对够用了！
引物二聚体就只有几十个bp，跑胶时别忘了加marker就行了嘛。
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想做RT的半定量，公司合成没用的。用了MARKER，也不太好区别呀，感觉又象带又象引物2具体。各位高手，大家来讨论一下，遇到这种情况有什么好的解决方法呢？
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发表于 2015-12-31 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2聚体大概都是在100bp位置的模糊带，和你的98应该是挺难区分的。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

的确很难区分，减少引物的量可以一定程度上减少引物二聚体！
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莲花白[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

的确很难区分，减少引物的量可以一定程度上减少引物二聚体！
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yayya[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
100bp左右，
消除的方法：
1.提高退火温度，可高至65度。
2.减少引物用量，如50ul 体系只用0.25ul（20uM）！
3.减少循环数，< 30.
4.ｄNTP用量减半。
当然，如果因物本身设计不合理的话，这些改进的意义就不会太大，这其中退火温度的影响最大！
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wawa[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物二聚体一般是60--70bp
你可以稀释引物，来减少二聚体的形成
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loli[使用道具]
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发表于 2015-12-31 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般是几十至一百BP左右，电泳条带模糊，如果条件允许的话，可以通过测序来区分引物带和目的条带
想减少引物二聚体，可以这样实验一下：在配PCR反应液的时候，在冰上操作，开机预热PCR仪，所有准备好之后，再加引物对，这样可有效减少杂带及引物带的形成
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