PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求提血清miRNA经验

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 20  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求提血清miRNA经验

dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
1

发表于 2016-1-6 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】求提血清miRNA经验

请问有实验室用qiagen miRNeasy mini kit 提取血清miRNA吗？求经验
为什么我每次提取的纯度都低，在1.2-1.3之间呀，是不是达到1.7以上才能进行逆转录呀，而且浓度也低， 根本不够逆转录。
貌似这款说明书说书适用于细胞和组织的，是不是不适用于血清miRNA提取呀？
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
2

发表于 2016-1-6 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你提取的miRNA纯度很低，是因为产量太低，导致仪器测量所得到的RNA纯度不够准确。不知道你是用多大体积的serum来提取miRNA的，建议参考PNAS这篇文章，尤其是附件里面的方法： cuturl('http://www.pnas.org/content/105/30/10513.abstract')
以及： cuturl('http://www.gene-quantification.de/mcdonalds-et-al-circulating-microrna-preanalytical-2011.pdf')
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
3

发表于 2016-1-6 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的200ul血清加1ml的Qiazol
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
4

发表于 2016-1-6 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的200ul血清加1ml的Qiazol
顶部
mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
5

发表于 2016-1-6 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每一例患者血清MIRNA提取一般要多少量才能够用做后面的RT-PCR研究呢?200ul？600ul？还是1毫升？
1、我想买QIAGEN公司的的“miRNeasy Serum/Plasma Kit”提取血清RNA，据说这公司的产品是RNA提取的领航企业， 我想这样富集的到的血清RNA会不会多一点，然后后续的RT-PCR产品，我想买TaKaRa公司的，毕竟经费受限啊，但是我的问题是不同公司的产品混用会影响实验结果吗？
2、最近在研究QIAGEN公司的的“miRNeasy Serum/Plasma Kit”说明书时看到，说明书写了50 ，问过他们公司，每一个试剂盒只能做50个样本，并且每个样本最多200ul，不晓得如果每一个标本只提取血清200ul，这样每一个病例富集到的MIRNA辆不晓得够不够做后续的3-5个MIRNA指标的RT-PCR呢？
顶部
jude[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态 离线
6

发表于 2016-1-6 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ambion的miRNA kit在文献中也很多，性价比很高，可以考虑下
顶部
wawa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71235
精华 0
积分 440
帖子 560
信誉分 100
可用分 3618
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态 离线
7

发表于 2016-1-6 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做血清的miRNA,用的trizol BD,浓度超级低……现在都不知道怎么办呢……现在也在纠结大家都用什么试剂盒比较好呢？而且后续的PCR是怎么操作呢？用的通用的miRNA引物逆转录还是颈环呢？
顶部
wawa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71235
精华 0
积分 440
帖子 560
信誉分 100
可用分 3618
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态 离线
8

发表于 2016-1-6 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我买了miRNeasy Serum/Plasma Kit试剂盒 但是还没开始提取 我们实验室有用过的 OD值都很低 但后期能测出Ct值 我也是做血清mirna的 希望能多交流交流
顶部
Darcy[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 71238
精华 1
积分 420
帖子 495
信誉分 102
可用分 3271
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-8-23
状态 离线
9

发表于 2016-1-6 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我将要做血清中microRNA的检测，希望各位前辈多多指教啊
顶部
yizhi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117886
精华 0
积分 364
帖子 467
信誉分 100
可用分 3071
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
10

发表于 2016-1-6 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想做探针型realtimepcr，在网上查试剂ABI家的好，还是qiagen的好？多谢指教！
顶部
 20  1/2 12››