小中大我加的是oxLDL,做凋亡的也是这八个浓度,请问发文章,qRT-PCR需要提供什么吗,还是只需要一个图呀?
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我讲下我的现在做qPCR数据处理流程吧:
1.我用的是ABI 7900HT来跑,用SDS2.4来分析,检测healthy 和patients两者表达miRNA的差异。
2.反应结束后,先看融解曲线,因为SDS2.4可以看到Tm 值,一般看三个重复之间是不是一致。如果有差异,我默认是0.2到0.5度以内,视实验是验证还是筛选。筛选做的是多重反转。
3.一般一个板里做两个内参,一是U6,一是5S,以2^(-Ct)换算,计算平均值,看两个内参之间有无差异,再以两者的Ct的平均数来做校准。
4.各检测组的Ct减去内参的平均值,以2^(-deltaCt)换算成表达值,以mean/sd的形式表示。以非配对T test来算差异P值,用prism 绘制成图表。
因为是比较正常与病态,只是用到delta Ct,没有用到delta delta Ct.