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酶放大免疫测定技术测定血浆(清)利多卡因（一）

关键词：浊度标准物质  食品安全检测标准物质  蔬菜农药残留检测  环境监测标准物质
  【实验原理】
  酶放大免疫测定技术(enzyme．multiplied immunoassay technique，EMIT)是最早取得实际应用的均相酶免疫测定方法。EMIT的基本原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性。当酶标半抗原与抗体结合后，由于空间位阻，使酶的活性中心受影响而活性被抑制。EMIT试剂盒中的主要试剂为：①抗体；②酶标半抗原；③酶的底物。检测对象为标本中的半抗原。当试剂①和试剂②与标本混合后，标本中的半抗原与酶标的半抗原竞争性地与试剂中的抗体相结合。如标本中的半抗原量少，与抗体结合的酶标半抗原的比例增高，游离的具有酶活力的酶标半抗原的量就减少。因此在反应后酶活力大小与标本中的半抗原含量互为消长，从酶活力的测定结果就可间接推算出标本中半抗原的量。
【试剂与器材】
  1．利多卡因试剂盒
  (1)试剂A：含抗体(由利多卡因与大分子载体结合成人工抗原后免疫绵羊而得)、底物6．磷酸葡萄糖及辅酶I(NAD+或NADH+H)及保存剂(0．05mol／L Tris-HCl缓冲液，pH 5．0)。
    (2)试剂B：含酶标药物(用G-6-PD标记的利多卡因)及保存剂(0．055mol／L Tris．HCI缓冲液，pH7．9)。
    (3)所有试剂均保存于2～8℃冰箱，使用时需放置到仪器试剂盘槽内，控制温度至10℃。
    2．标准品和质控品  试剂盒装有6瓶不同剂量的利多卡因标准品及l瓶利多卡因质控品。
    3．V-Twin全自动免疫分析仪(德国DADEBEHRING公司)
    4．样品要求
    (1)样本类型及样本量：采静脉血1～2ml，用固体肝素钠抗凝采血管。
    (2)样本处理：离心分取血浆(3000r／min，5分钟)。
    (3)储存和稳定性：当日不进行测定的血样需分离血浆，分离的血浆在-20～-35℃冰箱保存备测。
    【操作步骤】
    1．按仪器和试剂说明书设定相应参数。
    2．定标在V-Twin仪器上申请定标项目，选择“样品类型”为“CAL”→将100µl定标液(4～5滴)加DADE BEHRING公司Ⅵ儿童杯中一将定标系列液(儿童杯)按浓度由低到高顺序依次放置在申请指定的“S”位号→按F4清空样品盘→按F3开始分析。
    3．质控分析严格执行质控程序后进行样品分析。
    4．样品测定按上述V-Twin上机流程申请样品检测一离心将血浆分层后直接上机，依次放置在申请指定的对应样品位号→按F4清空样品盘→按F3开始分析。