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标题:【求助】提组织RNA时，为何OD值总是小于1.8

hyuu[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用TE稀释，用TE调0
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发表于 2016-1-8 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位的指点。
会不会是TRIZOL的问题了？我买的是韩国产的，价格很便宜。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。
有错误吧!OD280指的是蛋白质的吸光度呀,OD260才是核酸的吸光度!
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 小中大

小于1.8大多是蛋白污染，不大影响实验结果的
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feixi[使用道具]
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 小中大

分层后吸取上清液的时候不要贪心，离中间蛋白层还有段距离时就别吸了，用乙醇洗涤时多洗两遍。
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发表于 2016-1-8 10:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是出现这样的情况，做了一批标本，260/280都是1.1左右，电泳结果也不是太好，只吸取200ul上清液,每次乙醇洗两遍，也换了TRIZOL,沉淀在室温溶解大约有20分钟左右，我现在怀疑是不是我的样本问题。
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koook5695[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能说说你是什么材料吗？是不是多糖很多，或者开始的处理比较不得当？
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我选取的是大鼠的腹部脂肪组织，前几次先用液氮碾磨，再转移至冻存管加TRIZOL电动匀浆。这几次是液氮处理后没碾磨直接加TRIZOL电动匀浆的。结果都是一样。
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loli[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知搂主使用的是TE缓冲液测OD吗，一般来讲如果使用DEPC处理水会使
数值偏小的。
如果使用TE缓冲液效果没有改善，有可能是有蛋白的污染。
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Darcy[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是因为大鼠的腹部脂肪组织富含甘油三脂和其他脂类，所以会存在干扰？而且脂肪组织的RNA更容易降解。液氮研磨的时候要舍得加液氮，转圈研磨的彻底一些，取样时尽量新鲜，要保存在液氮里。再就是脂类会比较轻，加入trizol震荡分层后，会不会有油样的东西票在上面阿？把这层去掉。用酒精洗涤的时候多洗两遍。如果跑电泳能看到条带，说明RNA提出量还比较多的话，可以减少处理的组织量。
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