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标题:【求助】提组织RNA时，为何OD值总是小于1.8

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发表于 2016-1-8 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


应该是研磨过程中降解了吧，为什么不用液氮呢？买液氮可以租个小液氮罐嘛，甚至可以免费使用，我们这里液氮才15元/L。用液氮的话，组织就会变得很脆，用研钵就可以研磨完全了，不过记得剪刀，研钵什么都要用锡箔纸包起来180度烘4小时以上以去除rnase。
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发表于 2016-1-8 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我使用的是人体的宫颈组织，匀浆器无法完全研磨成匀浆，我就用剪刀剪。这些都是在冰块上操作。不知这个步骤会不会影响OD值。应该不是DEPC水和检测仪器的问题，因为其他人用的也是这个，测出的OD值都不低。
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发表于 2016-1-8 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们这边实验室里都是用的冰块，测出的OD值也不低呀。
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发表于 2016-1-8 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

sorry,很糊涂我的概念搞错了。od值主要用来反映纯度，跑电泳用来反映rna的完整性。你的od值小，应该是RNA不纯，不知道OD260/230怎么样。你看看上面qxkillgre的回答吧
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发表于 2016-1-8 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

组织能否完全研磨成匀浆是否也与比值有关？我的组织较硬，研杵研不碎，剪刀也不能完全剪成匀浆，所以每次总有一些微小的块状物。这是否会影响所提取RNA的质量了？
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发表于 2016-1-8 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然会有影响了，没有完全研磨成粉末状，与trizol反应时怎么能接触完全呢？必然导致块状物里的RNAse起作用。还是用液氮吧，我以前做的是海参的肌腱，不光硬而且还很韧，但是用液氮一冻就变得特别脆，用研钵可以完全研磨成粉末状了，趁液氮还没挥发完毕就转移到trizol里取得了很好的质量。
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发表于 2016-1-8 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
把异丙醇加大用量，再用乙醇多洗几次再看看。组织中RNA的量是多但是杂质也多。你可以试试！我们试过了很管用。
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下，用乙醇多洗几次，每次洗完都要离心吗？
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发表于 2016-1-8 10:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
醇加大到多少量？乙醇洗几次比较好了？
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是出现这样的情况，做了一批标本，260/280都是1.1左右，电泳结果也不是太好，只吸取200ul上清液,每次乙醇洗两遍，也换了TRIZOL,沉淀在室温溶解大约有20分钟左右，我现在怀疑是不是我的样本问题。

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我用Trizol提取昆虫的RNA，开始也是OD值小于1.8，但是我用琼脂糖检测有好好的三条带，然后我就用另一个核酸微量检测的仪器，发现OD260/280稳稳的在1.9多，所以有时候有可能是仪器原因，而且建议浓度和电泳同步进行！
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