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标题:【求助】RT-QPCR大家都用什么做标准曲线？

rxcc33[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】RT-QPCR大家都用什么做标准曲线？


进行反转录定量PCR，大家都用什么来作为标准品作标准曲线啊？用CDNA还是其普通PCR的扩增产物，还是质粒？如果用两步法的定量PCR，怎么样保证标准品的扩增效率与样品的扩增效率一致？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么没有人回复啊？
用CDNA，没有办法知道特定基因的标准品拷贝数，用普通PCR产物或者质粒作为标准品，其扩增效率可能与样品的扩增效率不一致。不知道大家平时研究是用的什么做的标准品。
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般都是用质粒的，pcr产物不纯，做标准不好。cdna做标准？量没法准确。
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koook5695[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用样品做梯度稀释做标准曲线，不需要绝对定量，做相对定量，主要是看扩增效率是否一致，这样做就可以了
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用样品的梯度稀释来做相对定量的标准曲线，如何判断其扩增效率是否一致，是不是看其标准曲线的斜率是否相同？能否传上来一个详细的资料，不胜感激！！
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发表于 2016-1-8 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也需要了解类似的问题。国外文献有用18s rRNA作为标准品的。
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yayya[使用道具]
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发表于 2016-1-8 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用RNA片段做标准品 是克隆提质粒酶切后反转录出来
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