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标题:[求助]我用试剂盒提取的DNA浓度太低了

douding66[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
强烈建议不管浓度如何，先用10微升做PCR看看结果如何。可知吸光光度计只有在你的DNA浓度在一定的范围内才准确有效的，不知你的稀释倍数。偶经历过的。现在从不再去测浓度了。
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冰儿0109[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说的浓度太低是什么意思。是提取之后跑胶的时候胶上根本没有条带吗？这样的话问题主要在细胞裂解和离心沉降上面，注意操作当中别把上清和废液搞混了。细菌浓度问题不大，一环足够了。关键是裂解要充分，离心要狠。
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何去何从[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
或者是跑胶的时候又明显的条带，而后你又测OD发现浓度太低。这样的话，你测到的值再低也无所谓了，因为PCR要求的模板不是很高，你只要再做个胶回收，稍微浓缩一下，P个结果出来是一点问题也没有啦。
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何去何从[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再有，是不是你已经做了PCR了，发现没有结果。这样你就的考虑自己提取的DNA片断的纯度了，PCR成败与否关键还是看模板的纯度。  
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森林木[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做PCR时将菌液直接加到反应管中就可以了，在94度变性时细菌会裂解，放出DNA，这种方法在我们实验实已经常规做了，并且效果很好。  
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